ГОСТ 7702.2.6—2015
При наличии сульфитредуцирующей способности у выделенных культур происходит почернение
сульфитной среды.
8.2.1 Определяют принадлежность к клостридиям микроорганизмов из темно-серых или черных
колоний, вызвавших почернение среды. Не менее пяти колоний пересевают в пробирки со средой
Китт-Тароцци (см. 7.3.5) и инкубируют при температуре (37 ♦ 1) °С в течение 24— 72 ч. При появлении
признаков роста микроорганизмов (помутнение среды, выделение газа, появление постороннего запа
ха) проводят микроскопирование с окрашиванием мазков по Граму иокрашиваниедля выявления спор
поГОСТ 10444.1 (см. 7.3.6). определение каталазнойактивности. При этом культурудля мазкови иссле
дований отбирают содна пробирки.
8.2.2 Определение принадлежности микроорганизмов к клостридиям после определения суль-
фитредуцирующейспособностидопускается проводитьна готовойулучшеннойклостридиальнойсреде
или приготовленной по пункту 5.47 ГОСТ 10444.1. или усиленном агаредля клостридий (см. 6.5).
8.2.3 Для определения каталазной активности на предметном стекле в каплю культуральной
жидкости (см. 8.2.1) добавляют каплю перекиси водорода (см. 6.3) массовой концентрации 30 г/дм3.
Выделение пузырьков газа свидетельствует о каталазной активности.
Сульфитредуцирующие клостридии каталазы необразуют.
8.2.4 Для сульфитредуцирующих клостридий характерен анаэробный рост,-
Для подтвержденияанаэроб1ЮГОроста культуру изсреды Китт-Тароцци пересеваютв стерильные
чашки Петри глубинным способом по ГОСТ 26670 с заливкой одной из агаризованных сред по
ГОСТ7702.2.0 (пункты2.4.1—2.4.5). Затвердевшуюсредунакрываютстерильным предметным стеклом,
чашки переворачивают, посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °Св течение24—48 ч. Появление
колоний в глубинеагара на2—3 мм от края стекла свидетельствуето принадлежности микроорганизмов к
клостридиям.
Допускается вместо подтверждения анаэробного роста проводить определение отсутствия роста
ваэробныхусловиях. При этом культуры высеваютвчашки Петрина поверхностьагаризованнойсреды.
Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37 • 1) °С в течение 18—72 ч.
8.3 При втором способе проведения исследования сначала пробу высевают в среду Китт-Тароц
ци. инкубируют, проводят микроскопирование. определение каталазы, пересев под стекло (см. 8.2.4).
Определив принадлежность микроорганизмов к клостридиям. проводят пересев на железосульфитсо
держащие среды (см. 6.4, 6.6. 7.3.2, 7.3.3, 7.3.13). Определяют сульфитредуцирующую
способность выделенныхклостридий по 8.2.
8.4 Выделение спор сульфитредуцирующих клостридий проводят после прогревания исследуе
мого материала. Пробирки с исследуемой пробой и (или) ее разведений помещают в водяную баню
температурой (80± 1)вС.
Водув бане нагреваютдодостижения внутри пробы температуры (80 i 1)°С, которую определяют
термометром в контрольной параллельной пробирке сосредой без посева. Прогрев проводятв течение
(20 • 1) мин. Затем пробирки с исследуемым материалом охлаждают водопроводной водой. Далее
исследование проводят по8.2.
8.5 Определение количества сульфитредуцирующих клостридий
8.5.1 Определение количества сульфитредуцирующих клостридий проводят методом посева в
железосульфитсодержащие агаризованиые среды пометоду НВЧ.
8.5.2 При определенииколичествасульфитредуцирующихклостридийметодом посева ва в и зо
ванные среды по 1см3разведений пробы вносят вдве чашки Петри. Посевы заливаютодной изжелезо
сульфитсодержащих агаризованных сред (см. 6.4, 6.6, 7.3.2, 7.3.3. 7.3.13). Проводят инкубирование в
анаэробных условиях по 8.2 с последующим подсчетом.-
При количественном определении необходимо проводить подтверждение принадлежности к
сульфитредуцирующим клостридиям колоний, выросших на железосульфитсодержащих средах.
8.5.3 При определении количества сульфитредуцирующих клостридий по методу НВЧ высевают
три последовательных 10-кратных разведения в регенерированнуюсреду Китт-Тароцци. Каждое разве
дение в трехкратной повторности, соотношение высеваемого материала к питательной среде 1:9.
Инкубирование посевоввыделеннойкультуры проводят по 8.2.
4