ГОСТ 33642—2015
Приложение А
(рекомендуемое)
Культивирование Chironomus riparius
А.1
Л
ичинки Chironomus культивируют в кристаллизационных чашках или более крупных контейнерах. Мел
кий кварцевый песок распределяют гонким слоем высотой примерно 5-10 см над дном контейнера. Было пока
зано. что кизельгур (например. Merck. Art 8117) является подходящим субстратом (достаточным является более
тонкий слой в несколько мм). Затем добавляют соответствующую требованиям воду на высоту несколько
санти метров. Уровень воды пополняют при необходимости для восстановления потерь в результате испарения и
преду преждения высыхания. Воду заменяют при необходимости. Проводят легкую аэрацию. Сосуды с
культивируемыми личинками находятся в подходящей камере, которая будет предупреждать вылет вылупившихся
взрослых особей. Камера должна быть достаточно большой, чтобы обеспечить роение вылупившихся взрослых
особей, иначе не будет происходить копуляция (минимальный размер составляет примерно 30 * 30 * 30 см).
А.2 Камеры находятся при комнатной температуре или при постоянной температуре окружающей среды
(20
±
2) "С со световым периодом 16 ч свет (интенсивность примерно 1000 люкс). 8 ч темнота. Имеются данные,
что влажность воздуха менее 60 % относительной влажности может тормозить репродукцию.
Вода для разведения
А.З Используют любую соответствующую требованиям природную или искусственную воду. Обычно исполь
зуют колодезную воду, дехлорированную водопроводную воду и искусственные среды (например, среда Elendt
«М4» или «М7». см. ниже). Перед применением воду аэрируют. При необходимости культуральную воду обновля
ют. осторожно сливая или откачивая использованную воду из сосудов для культивирования, не нарушая трубочек
личинок.
Кормление личинок
А.4
Л
ичинок Chironomus кормят хлопьевидным кормом для рыб (Tetra Min®, Tetra Phyll® или кормом для рыб
другой аналогичной марки) из расчета примерно 250 мг на сосуд в сутки. Корм вносят в виде сухого размельчен ного
порошка или в виде суспензии в воде: 1.0 г хлопьевидного корма добавляют к 20 мл воды для разведения и
перемешивают для получения однородной смеси. Такую суспензию скармливают из расчета 5 мл на сосуд в сутки
(перед использованием встряхивают).
Л
ичинки более старшего возраста получают большее количество корма.
А.5 Кормление корректируют в зависимости от качества воды. Если культуральная среда становится «мут
ной». то количество вносимого корма уменьшают. Добавление корма тщательно контролируют. Слишком малое
количество корма будет вызывать переселение личинок по водной колонке, а слишком большое количество корма
будет вызывать повышенную микробиологическую активность и снижение концентрации кислорода. Оба фактора
могут приводить к пониженным скоростям роста.
А.6 При закладке новых сосудов для культивирования также можно добавлять некоторые зеленые водорос
ли (например. Scenedesmus subspicatus, Chlorella vulgaris).
Кормление вылупившихся взрослых особей
А.7 Некоторые экспериментаторы предложили использовать ватные папочки, пропитанные насыщенным
раствором сахарозы, служащие в качестве корма для вылупившихся взрослых особей.
Вылупленив
А.8 При температуре (20
±
2) "С взрослые особи начинают вылупляться в сосудах с культивируемыми личин
ками примерно через 13-15 сух Самцов легко отличить по перистым усикам.
Кладки яиц
А.9 После появления взрослых особей внутри камеры для культивирования всесосуды для культивирования
личинок тщательно осматривают три раза в неделю на отложение студенистых кладок яиц. Если они присутствуют, то
кладку яиц осторожно удаляют. Ее переносят в небольшую чашку, содержащую пробу воды для культивирова ния.
Кладку яиц используют для закладки нового сосуда для культивирования (например. 2-4 кладки яиц/сосуд) или
используют для испытания токсичности.
А.10
Л
ичинки первой стадии развития вылупляются через 2-3 сут.
Закладка новых культуральных сосудов
А.11 После получения культур закладывают новые сосуды для культивирования личинок каждую неделю или
реже в зависимости от требований испытания, удаляя более старые сосуды после вылупления взрослых комаров.
Используя такую систему, можно получить регулярную продукцию взрослых особей при минимальных усилиях.
Получение испытуемых растворов «М4» и «М7»
А.12 Elendt (1990) описал среду «М4». Среду «М7» готовят как и среду «М4». за исключением веществ, при
веденных в таблице А.1. концентрации которых в четыре раза ниже в среде «М7», чем в среде «М4». В литературе
описано приготовление среды «М7» (Elendt. персональное сообщение). Испытуемый раствор не следует готовить в
соответствии с Elendt и Bias (1990)для концентраций NaSi03 •5 Н20. NaN03, КН2Р04 и К^РОд. которые не под
ходят для приготовления стоковых растворов.
10