ГОСТ 33526—2015
6.1.6.3 Приготовление раствора внутреннего стандарта демеклоциклина
В мерную пробирку вместимостью 10 см3помещают 10 мг демеклоциклина. взвешенного с точ
ностью до 0.5 мг. Добавляют 5 см3 метанола и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. Объем
полученного раствора доводят метанолом до метки.
Массовая концентрация раствора внутреннего стандарта демеклоциклина в растворе состав
ляет 1 мг/см3 (уточненное значение концентрации внутреннего стандарта рассчитывается с учетом
содержания основного вещества).
Путем нескольких разбавлений доводят массовую концентрацию раствора внутреннего стан
дарта демеклоциклина до значения 1 мкг/см3. Раствор с данной концентрацией используют для вне
сения в исследуемые образцы.
Раствор хранят при температуре минус (20
±
2) вС не более 3 мес.
Перед применением раствор выдерживают при комнатной температуре в темном месте не ме
нее 20 мин.
6.2 Подготовка хроматографической системы
6.2.1 Включают хроматограф. Подготовку хроматографа к работе осуществляют в соответствии
с Руководством по эксплуатации прибора.
6.2.2 Устанавливают следующие условия хроматографирования:
- скорость потока элюента - 0.1 см3/мин;
- объем вводимой пробы - 20 мм3;
- температура хроматографирования —(30
±
1) °С;
-длина волны детектирования 280 нм.
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования: с 0 % до 55 % мобильной фазы Б
(6.1.4.2) за 25 мин.
6.2.3 Перед каждым измерением для оценки работы хроматографа проводят контрольное из
мерение. вводя в хроматограф образец с известным значением содержания антибиотика. В качестве
такого образца может служить раствор антибиотика, приготовленный из реактива антибиотика с из
вестным содержанием антибиотика.
6.3 Построение градуировочной характеристики
6.3.1 Для построения градуировочной зависимости анализируют серию градуировочных образ
цов, приготовленных по 6.1.6.2. в условиях, описанных в 6.2 и 7.
6.3.2 Используя программное обеспечение, прилагаемое к хроматографу, строят график зави
симости массовой концентрации антибиотика от отношения площади хроматографического пика ан
тибиотика к площади пика внутреннего стандарта.
Градуировочная характеристика считается приемлемой, если рассчитанное значение квадрата
коэффициента корреляции для градуировочной характеристики каждого антибиотика составит не ме
нее 0,98.
6.3.3 Градуировку проводят не реже одного раза в месяц, а также при изменении условий хро
матографического анализа, при смене колонки, при замене реактивов или несоответствии результа тов
метрологическим требованиям.
6.4 Подготовка проб продуктов
6.4.1 Пробы молока и жидкой молочной продукции перемешивают путем перевертывания емко
сти с пробами не менее трех раз.
Пробы продуктов освобождают от упаковки, нагревают до температуры (20
±
2) °С. аккуратно
перемешивают и сразу же проводят измерение.
6.4.2 Пробы продуктов, содержащие ароматизаторы, пищевкусовые добавки (кофе, какао,
фруктово ягодный или овощной наполнитель и т.д.), образующие с продуктом однородную структуру,
а также неотделяемые пищевкусовые компоненты (например, кокосовую стружку), полностью осво
бождают от упаковки (при наличии), помещают в лабораторный стакан вместимостью 500-1000 см3и
нагревают на водяной бане до температуры (32
±
2) °С. после чего полностью переносят в стакан го
могенизатора и гомогенизируют в течение 1-3 мин при частоте вращения ножей от 2000 об/мин до
5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 см3
с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20
±
2) °С. Пробу для анализа отбирают сразу
же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
6.4.3 Пробы творога, творожных продуктов и творожных полуфабрикатов нагревают до темпе-
5