ГОСТ 33429— 2015
8.2 Приготовление растворов
8.2.1 Приготовление 2%-ного раствора трихлоруксусной кислоты
Взвешивают 2,0 г трихлоруксусной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3,
растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки. Раствор помещают в коническую колбу с
притертой пробкой.
Готовый раствор хранят в колбах с притертыми пробками, при комнатной температуре не более
1 мес.
8.2.2 Приготовление подвижной фазы хроматографической системы
В качестве подвижной фазы используют буферный раствор фосфорнокислого калия
однозамещенмого молярной концентрации с(КНгР04)=0.1 моль/дм3с pH = 6.0 (фосфатный буфер).
Для приготовления фосфатного буфера взвешивают 13.6 г фосфорнокислого калия
однозамещенного, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и доводят объем до метки
дистиллированной водой, тщательно перемешивают до полного растворения. С помощью
градуированной стеклянной пипетки добавляют по каплям ортофосфорную кислоту, доводя pH до 6.0
ед. pH и контролируя pH-метром. Перед использованием раствор дегазируют на ультразвуковой бане в
течение 10— 15 мин.
Готовый раствор хранят в колбах с притертыми пробками при комнатной температуре не более
недели.
8.3 Подготовка пробы
Пробу массой 10 г взвешивают с записью результата до второго десятичного знака, помещают в
центрифужную пробирку вместимостью 50 см3. Добавляют 30 см32%-ного раствора трихлоруксусной
кислоты и тщательно гомогенизируют. Гомогенат ставят на ультразвуковую баню при температуре 20
°С на 15 мин. Затем центрифугируют 5 мин с центробежным ускорением 4000
д
.
Полученный
супернатант пропускают через мембранный фильтр с диаметром пор 0.45 мкм в хроматографическую
виалу вместимостью 2 см3.
9 Проведение измерений
9.1 Условия проведения измерений подбирают в зависимости от вида применяемого
жидкостного хроматографа и хроматографической колонки.
Проводят градуировку хроматографа с помощью градуировочных растворов, далее проводят
измерения анализируемой пробы.
В качестве примера могут быть приведены следующие условия хроматографического
определения молочной кислоты и лактатов, выполненного на жидкостном хроматографе с
ионообменной хроматографической колонкой 4.6 >«150 мм. 5 мкм:
0.02 см3анализируемой пробы вводят в подготовленный к работе жидкостный хроматограф.
Элюирование проводят в изократических условиях в течение 15 мин.
Состав элюента: фосфатный буфер (pH = 6.0). Скорость подачи элюента — 0.8 см3/мин.
Температура колонки — 30 °С.
Длина волны детектирования — 210 нм.
9.2 Идентификацию пиков хроматограммы анализируемой пробы проводят сравнением с
хроматограммой градуировочного раствора по двум параметрам: времени удерживания и
спектральному отношению
R
(отношение высот хроматографического пика на разных длинах волн).
9.3 Если время удерживания и спектральные отношения пиков хроматограммы анализируемой
пробы совпадают в пределах допускаемых отклонений (Д
R
S 0,05.
A
t
R
S 3 %) с временем
удерживанияи спектральнымиотношениямисоответствующихимпиковхроматограммы
градуировочного раствора, результат идентификации считают положительным.
9.4 Если спектральные отношения совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница
времениудерживанияпиковхроматограммыанализируемойпробыихроматограммы
градуировочного раствора больше допускаемого отклонения, проводят хроматографический анализ
соответствующего градуировочного раствора по 8.1 и сравнивают время удерживания. В случае
совпадения в дальнейшем в качестве образца используют новую хроматограмму.
В случае повторного несовпадения времени удерживания используют метод добавок, для чего к
анализируемой пробе добавляют известные количества определяемой молочной кислоты с
концентрацией, сравнимой с концентрацией «сомнительных» пиков, и анализируют по 8.1.
Если на хроматограмме пробы с добавкой площади «сомнительных» пиков увеличились на
величину, соответствующую величине добавки, эти пики относятся к определяемым компонентам.
4