ГОСТ I»52173-2003
6.1.10 Приготовление 1ТВЕ буфера для электрофореза
В мерную колбу вместимостью 1000 см! вносят 10,8 г Трнс (оксиметил) аминометана. 5,5 г
борной кислоты по Г’ОСГ 9656 и 0.92 г этиленлнаминтетрауксусиой кислоты, доводят дистиллиро
ванной водой до метки, перемешивают до полного растворения.
Срок хранения при комнатной температуре —не более 1мес.
6.1.11 Приготовление раствора концентрацией с (C^H^N^Br) = 10 мг/см1
В мерную колбу вместимостью 100 см* помешают 1г бромистого этидия по 4.35, 114|, раство
ряют и доводят до метки дистиллированной водой.
Срок хранения при температуре от 4 ’С до 5 ’С —не более 12 мес.
6.1.12 Приготовление 2 %-ного агарозного геля
6.1.12.1 В плоскодонную стеклянную колбу вместимостью не менее 200 см* помешают I г ага
розы по 4.39, |18|. добавляют 50 см1буфера I ТВЕ, приготовленного по 6.1.10. тщательно переме
шивают взбалтыванием. Колбу со смесью нагревают в микроволновой печи по 4.10 или на водяной
бане при температуре 100 *С и кипятят до полного расплавления агарозы.
6.1.12.2 Расплавленную агарозу, приготовленную по 6.1.12.1, охлаждают при комнатной тем
пературе до 50 "С, автоматическим микродозатором добавляют 5 мм1раствора бромистого этидия,
пригото&леиного по 6.1.11, тщательно перемешивают круговыми движениями.
6.1.12.3 Однородную смесь, полученную по 6.1.12.2, разливают в кюветы для электрофореза и
с помошью гребенки формируют карманы. Через 15—30 мин после остывания геля гребенку удаля
ют.
Допускается хранение геля в 1ТВЕ буфере для электрофореза, приготовленного по 6.1.10,
в холодильнике при температуре от 4 ’С до 5 *С - не более 7 сут.
6.2 Подготовка пробы
6.2.1 Две навески анализируемого продукта, навеску стандартного образна состава генетичес
ки не модифицированного источника пиши растительного происхождения (Certified Reference Material
1RMM № 4I0R SB-0) no 4.41, |20| и навеску стандартного образца состава генетически модифици
рованного источника пищи растительного происхождения (Certified Reference Material IRMM
№ 410R SB-5) no 4.42, |21| массой от 70 до 80 мг каждая помешают в четыре
микроцентрнфужные пробирки типа Эппендорф вместимостью 1,5 см3. С помощью дозатора
добавляют в каждую по 200 мм3лизирующего буфера с меркаптоэтанолом по 6.1.5 и немедленно
тефлоновым пестиком растирают смесь до получения однородной массы. В каждую
микроцентрифужную пробирку добав ляют по 600 мм1лизирующего буфера с меркаптоэтанолом.
Смесь тщательно перемешивают тефло новым пестиком, не допуская образования комков. Затем
смесь перемешивают в течение 30 с на аппарате для встряхивания типа «Вортекс*.
6.2.2 Приготовленные по 6.2.1 смеси помещают в термостат, инкубируют при температуре
65 *С 40—60 мин, после чего повторно перемешивают 30 с на аппарате для встряхивания и центри
фугируют 7 мин на настольной .микроцентрифуге типа Эппендорф по 4.7, |5| при частоте вращения
li0 0 0 -13000 мин-’.
6.2.3 Надосадочную жидкость приготоатенных по 6.2.2 смесей переносят в четыре чистые мик-
роиентрифужные пробирки вместимостью 1,5 см1, не захватывая частицы суспензии из осадка. За
тем в каждую микроиентрифужную пробирку добаатяют по 400 мм’хлороформа, прнгото&ленного
по 6.1.6. перемешивают на аппарате для встряхивания 30 с до образования суспензии. Полученные
суспензии центрифугируют 7 мин на настольной микроцентрифуге типа Эппендорф при частоте
вращения 12000 мин-’ при комнатной температуре.
6.2.4 Верхние слои (водные фазы), приготоатенные по 6.2.3, из четырех пробирок переносят
в четыре чистые микроцентрнфужные пробирки вместимостью 1,5 см3, не захватывая слой хлоро-
форма. Экстракцию хлороформом и центрнфугироазние по 6.2.3 повторяют дважды.
6.2.5 Верхние слон (водные фазы), приготовленные по 6.2.4, переносят в четыре чистые мик
роиентрифужные пробирки вместимостью 1,5 см’, добавляют в каждую из них по 600 мм5изопропи
лового спирта по 4.28, 110]. предварительно охлажденного в морозильной камере до температуры
минус 20 “С, и перемешивают на аппарате для встряхивания 30 с.
Полученные смеси помешают в морозильную камеру температурой минус 20 “С не менее чем
на 30 мин для образования осадка дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК).
На данном этапе допускается хранение полученных смесей до 12 ч в морозильной камере при
температуре минус 20 "С.
5