ГОСТ Р 52173-2003
Т а б л и ц а I — Условия амплификации для JSS промотора
С т а д и я
Т и п а м и л и ф и к а го р а
C ro c o d ile II
G e n e
Amp 2400
P ro g e n e
T rio
Т е р и и к
М С -2
Денатурация
Амплификация
Количество циклон
2 мин/98 Т
8 с/95Т
30 с/54 Т
40 с/72 ’С
40
3 мин/72 ‘С
1 мин/30 ’’С
1 ‘С/с
Конечное удлинение
Фаза остывании
Скорость нагрева
Скорость остывания
1 ‘С/с
3 мин/94 ’С
20 с/94 ‘С
40 с/54 "С
60 с/72 ‘С
40
3 мин/72 ‘С
1 мин/4 ‘С
0,77 Т /с
3.15‘С/с
3 мин/95 Т
36 с/95 ‘С
72 с/54 Т
84 с/72 Т
40
3 мин/72 ‘С
1 мин/4"С
1,5Т /с
1.5 Т /с
2 мин/% Т
30 с/95 Т
40 с/54 Т
40 с/72 Т
40
3 мин/72 Т
1 мин/4 Т
1Т /с
1 Т /с
3 мин/94 Т
20 с/94 Т
40 с/54 Т
60 с/72 Т
40
3 мин/72 Т
I мин/4 Т
0,77 ‘С/с
3.15‘С/с
Т а б л и ц а 2 — Условия амплификации дли герминатора nos
С т а д и я
Т и п а м п л и ф н к а т о р а
C ro c o d ile II
G e n e
A m p 2 400
P ro g e n e
T rio
Т е р и и к
М С -2
Денатурация
Амплификация
3 мин/94 Т
20 с/94 Т
40 с/54 Т
60 с/72 Т
4 0
Количество циклов
Конечное удлинение
Фаза остывания
Скорость нагрева
Скорость остывания
3 мин/95 ‘С
20 с/95 ‘С
40 с/54 Т
40 с/72 ‘С
40
3 мин/72 ‘С
1 мин/30 Т
1 ‘С/с
1 ‘С/с
3 мин/94 Т
20 с/94 Т
40 с/54 Т
60 с/72 Т
40
3 мин/72 Т
1 мин/4 Т
0,77 Т /с
3,15 Т /с
3 мин/95 Т
36 с/95 Т
72 с/54 Т
84 с/72 Т
40
3 мин/72 Т
1
мнн/4 Т
1.5 Т /с
1.5 Т /с
2 мин/98 Т
30 с/95 Т
40 с/54 Т
40 с/72 ‘С
40
3 мин/72 ‘С
1 мин/4’С
1 ‘С/с
1 ‘С/с
3 мин/72 Т
1 мин/4‘С
0,77 ‘С/с
3,15‘С/с
7.4 По окончании ПЦР из каждой микроцентрнфужной пробирки осторожно из-под слоя
вазелинового масла отбирают по 8 мм3смеси и переносят в отдельный карман геля, приготовленно го
по 6.1.12.
7.5 В отдельный карман геля вносят 8 мм4маркера молекулярной массы ДНК по 4.40. |19].
7.6 Гель помешают в камеру прибора по 4.2, |2| для проведения горизонтального электрофоре
за, заполненную буфером I ТБЕ.
Электрофорез проводят при напряженности электрического поля 6 В/см геля в условиях ста
билизации напряжения в течение 65 мин.
7.7 Визуализацию продуктов ПЦР после электрофореза осуществляют с помощью видеосисте
мы по 4.4, |4|.
7.8 Результат идентификации в виде файл-паспорта сохраняется на жестком магнитном носи
теле и может быть выведен на видеомонитор или принтер. Примеры изображений приведены в
приложениях Л и Б.
8 Обработка результатов анализа
8.1В пробе со стандартом ГМИ |ДНК. выделенная из стандартного образца состава генетичес
ки модифицированного источника пиши растительного происхождения (Certified Reference Material
IRMM № 41OR SB-5), содержащего промотор J55’| должна присутствовать окрашенная полоса,
размер ПЦР-продукта, формирующего эту полосу на гель-электрофореграмме, составляет 195 пар
7