ГОСТ 32375—2013
4.4 Проверка на достоверность
Чувствительность и надежность используемой экспериментальной техники должны оцениваться
каждые шесть месяцев с помощью стандартных веществ, обладающих легким и умеренным
сенсибилизирующим действием.
В правильно проведенном испытании для легких/умеренных сенсибилизаторов должны
наблюдаться отклики: минимум 30 % для адъювантного теста и не менее 15 % для неадъювантного. В
качестве стандартных веществ предпочтительно использовать гексилциннамальдегид (CAS No 101-86-
0). меркаптобензотиазол(CAS Ne 149-30-4) и бензокаин (CAS No 94-09-7). При определенных
обстоятельствах могут применяться другие контрольные вещества, удовлетворяющие приведенным
критериям, с соответствующим обоснованием.
4.5 Удаление исследуемого вещества
Для удаления исследуемого вещества используют воду или растворитель, не влияющий на
полученную реакцию и целостность кожного покрова.
5 Процедура испытаний
5.1 Максимизационный тест на морских свинках (GPMT)
5.1.1 Количество животных
Группа, подвергающаяся воздействию, должна содержать как минимум 10 животных,
контрольная группа - 5. При использовании менее 20 тестовых и 10 контрольных морских свинок
невозможно сделать вывод о том. является ли вещество сенсибилизатором, поэтому строго
рекомендуется исследование дополнительных животных для получения как минимум 20 тестовых и
10 контрольных животных.
5.1.2 Уровни доз
Концентрация исследуемого вещества для индукционной экспозиции должна быть хорошо
физиологически переносима и вызывать легкое/умеренное раздражение кожи. Концентрация в
провокационной экспозиции не должна вызывать раздражение. Подходящие концентрации должны
быть определены в предварительном испытании на 2-3 животных, если другая информация
отсутствует. Для этой цели предпочтение отдают ПАФ-обработанным животным.
5.1.3 Индукционная экспозиция: подкожные инъекции
День 0 - исследуемая группа
Три пары подкожных инъекций объемом 0.1 мл должны быть введены в плечевую область,
очищенную от шерсти таким образом, чтобы инъекции были по обе стороны срединной линии:
инъекция 1- смесь 1:1 (по объему) ПАФ/вода или физиологический раствор:
инъекция 2 - исследуемое вещество в подходящем растворителе в выбранной концентрации;
инъекция 3 - исследуемое вещество в выбранной концентрации в смеси 1:1 (по объему)
ПАФ/вода или физиологический раствор.
В инъекции 3 растворимые в воде вощества до смешивания с ПАФ растворяют в воде.
Жирорастворимые или нерастворимые вещества до перемешивания с водой растворяют в ПАФ.
Конечная концентрация исследуемого вещества должна быть равной концентрации в инъекции 2.
Инъекции 1 и 2 вводят близко друг другу и к голове животного, в то время как инъекцию 3 вводят
ближе к хвостовой части тестовой области.
День 0 - контрольная группа
Три пары подкожных инъекций объемом 0.1 мл вводят в одно и то же место животным, не
подвергшимся обработке:
Инъекция 1- смесь 1:1 (по объему) ПАФ/вода или физиологический раствор;
Инъекция 2 - неразбавленный растворитель;
Инъекция 3 - 50 % растворителя в смеси 1:1 (по объему) ПАФ/вода или физиологический
раствор.
5.1.4 Индукционная экспозиция: местное нанесение
День 5-7 - тестовая и контрольная группы
Примерно за 24 часа до нанесения вещества, если вещество не является раздражающим для
кожи, тестовая область после стрижки или бритья обрабатывается 0,5 мл 50 % натрий-
лаурилсульфатом в вазелине для того, чтобы вызвать местное раздражение.
День 6-8 - тестовая группа
С тестовой области снова удаляется шерсть. Фильтровальная бумага (2x4 см) полностью
заполняется исследуемым веществом в подходящем растворителе и накладывается на тестовую
область и находится в контакте с кожей под герметичной повязкой в течение 48 часов. Выбор
растворителя должен быть обоснован. Твердые вещества измельчаются и помещаются в
подходящий растворитель. Жидкости, при необходимости, можно наносить неразбавленными.
2