ГОСТ Р 56236-2014 (ИСО 6341:2012)
Емкости для культивирования заполняют на У<объема культивационной водой и помещают туда са
мок дафний среднего размера с выводковыми камерами, заполненными эмбрионами и неплотно прикрывают
пластинами из стекла или оргстекла толщиной не менее б мм (от попадания пыли и для уменьшения испа
рения). Для пересадки в емкости для культивирования допускается отбирать взрослых самок с
использова нием фильтрования культуры через крупное сито с отверстиями размеров ячеек 1800-2200мкм.
Маточную культуру Daphma magna Straus поддерживают в одной или двух емкостях. Ежедневно с по
верхности воды емкостей, в которых культивируют тест-организмы, марлевой салфеткой снимают дрож
жевую и бактериальную пленку. После этого воду вместе с рачками осторожно переливают в чистую ем
кость так. чтобы накопившийся осадок остался на дне. В чистую емкость добавляют свежую культиваци
онную воду.
Таким способом, ежедневно проводят очистку поверхности воды и дна емкости, в которой культиви
руются рачки. Кормление маточной культуры дафний осуществляют ежедневно в соответствии с требо
ваниями п. Б.3.3. Содержание растворенного кислорода в воде емкости должно быть не менее 6 мгОз/дМ3, что
достигается приготовлением культивационной воды по 5.3.2 и регулярной пересадкой дафний в свежую
культивационную воду. Аэрирование воды в емкостях с дафниями при культивировании не допускается.
Один или два раза в неделю осуществляют пересадку маточной культуры в свежую культивационную
воду. Частоту пересадки определяют плотностью маточной культуры и содержанием растворенного кис
лорода в культивируемых емкостях (плотность маточной культуры 20-25 особей на 1dMJ
культивационной воды).
Не допускается использование молоди маточной культуры для тестирования.
Появившуюся молодь в необходимом количестве отсаживают в отдельные емкости от поколения к поколе
нию. Когда вновь народившиеся тест-организмы начинают размножаться, материнские особи удаляют. Каждое
поколение маркируют и на емкости ставят дату рождения. Одновременно в лаборатории содержат культуры двух
поколений.
При культивировании и проведении токсикологических опытов необходимо поддерживать непрерывное
партеногенетическое размножение тест-организмов, учитывая особенности биологического цикла их развития.
Длительное культивирование тест-организмов в лабораторных условиях позволяет устанавливать
пределы изглвнчивости основных биологических показателей в зависимости от сезона. В оптимальных усло
виях содержания выживаеглэсть тест-организмов не зависит от времени года. Средние значения плодови
тости за 30 сут составляют от 60 до 170 экземпляров молоди на одну самку (за это время получают 7-8
погретое). Могут наблюдаться повторяющиеся снижения плодовитости тест-организмов в зимний (ноябрь-
январь) и летний (июнь-июль) периоды. Длительность культивирования тест-организмов в лаборатории в
оптшлальныхусловиях даже в течение 10лет не влияет на результаты опытов.
Этот вид является бвтамезосапробом. перенося осолонвние до 6 г/дм’. Оптимальное содержание кис
лорода для тест-организмов составляет 7-8 мгСЬ’дм1однако тест-организмы способны переносить сниже
ние концентрации кислорода до 2 мг Oj/flMJ.
В.3.2 Адаптация Daphnia magna Straus к среде с повышенной минерализацией
При необходимости биотестирования проб воды или различных водных вытяжек из проб отработан
ных буровых растворов, донных отложений, твердых промышленных отходов, грунтов и почв с общим со
держанием солей свыше 3 г/дм’ выращивают культуру Daphnia magna Straus, адаптированную к повышенной
минерализации среды. Для этого в воду, в которой культивируют Daphnia magna Straus, минерализация ко
торой известна, постепенно порциями добавляют хлористый натрий. В начале его вносят из расчета
500 мг/dif. Затем постепенно через неделю минерализацию воды повышают на 250 мг/дм3и повторяют
каждую неделю до тех пор. пока содержание солей в среде не достигнет нужного уровня (но не свыше б
г/дм3с уче том начальной минерализации). В дальнейшем достигнутый уровень минерализации среды
поддерживают постоянно.
Эта же среда служит контролем при тестировании и в качестве воды для разбавлений. Адаптирован
ную культуру Daphnia magna Straus к повышенному содержанию солей нельзя использовать для тестирова
ния вод с более низкой минерализацией.
Оптимальные значения культивационной воды pH составляет 7,0-8,0. однако временные изменения pH в
пределах 5.8-9.0 не подавляют существенным образом жизнедеятельность тест-организмов.
В.3.3 Кормление
Тест-организмы Daphnia magna Straus кормят двумя видами одноклеточных водорослей, выращиваемых в
лабораторных условиях. Scenetiesmus qvadricauda и Chloretla vulgaris. Эти водоросли выращивают с использова
нием асептической технологии, чтобы исключить заражение культуры бактериями, водорослями и простейшими
организмами. Для выращивания водорослей Scenedesmus Qvadricauda и Chloretla vulgaris используют питатель
нуюсреду Прата.
Исходные растворы № 1— N94 для приготовления питательной среды Прата готовят на дистилли
рованной воде из реактивов, вносимых в количествах, приведенных в таблице В. 1.
Исходные растворыхранятпри температуре О1’С— 4 "С не более года.
Питательную среду Прата готовят следующим способом: в мерную стеклянную колбу вместшмстью
1000 см’ вносят дистиллированную воду до метки, затем переливают в колбу вместимостью 2000 см3и до
бавляют по 1см1исходных растворов N9 1, № 2 и № 3 (см. таблицу В.З). перемешивают, плотно
закрывают ватно-марлевой пробкой и колпачком, затем кипятят на водяной бане в течение 15 мин.
после чего содвр-
25