ГОСТ Р 56236—2014 (ИСО 6341:2012)
Приложение В
(обязательное)
Методы культивирования тест-организмов
В.1 Условия культивирования тест-организмов. Общие требования.
В.1.1 Исходный материал для культивирования тест-организмов Daphnia magna Straus получают в ла
бораториях. занимающихся тестированием, имеющих культуру требуемой видовой принадлежности. Чув
ствительность культур к модельному токсиканту должна соответствовать установленному в настоящем
стандарте диапазону ЭКц>за 24 ч (методы А и В).
Тест-организмы культивируют и содержат в климатостате, в инкубаторе или в помещении с регулируемой
температурой (20 ± 2) °С.
При этом обеспечивают естественное или искусственное освещение так. чтобы соблюдались следующие
периоды выдержки: 16 ч — воздействие света при освещенности 500 — 1000 лк. 8 ч — без воздействия света (в
темноте).
Тест-организмы Daphnia magna Straus необходимо защищать от воздействия прямого солнечного света.
Тест-организмы и культивационная вода, в которой проводят их культивирование, должны содержаться в
емкостях только из стекла или полимерного материала, изготовленного без использования пластификатора.
П р и м е ч а н и я
1 Тест-организмы — пресноводные ракообразные Daphnia magna Straus: имеют широкое географическое
распространение, обладают коротким жизненным циклом и требуют минимум пространства и оборудования для
культивирования и проведения тестирования. Тест-организмы можно культивировать постоянно в лабораторных
условиях.
2 Развитие ракообразных Daphnia magna Straus проходит через три стадии: новорожденный организм,
молодь и взрослые особи. При температуре 20 :’С развитие только что вылупившихся новорожденных орга
низмов до взрослой стадии проходит через 7 сут. Новорожденные дафнии выпускаются непосредственно из
яйцевого мешка женскойособью Daphnia magna Straus в течение 1-2сут.
В.1.2 Вода для культивирования тест-организмов по 5.3.2 и 5.2 настоящего стандарта (далее — культива
ционная вода) должна соответствовать условиям тестирования [см. 5.3.2 и Е.1 (приложение Е)).
В.1.3 Емкости, применяемые для культивирования тест-организмов, должны быть оснащены свободными
или перфорированными крышками, чтобы уменьшить испарение, но обеспечить газообмен.
В.1.4 Емкости тщательно моют при каждой замене культивационной воды.
В.1.5 В качестве корма используют культуры пресноводных одноклеточных водорослей Scenedesmus
qvadhcauda или Chloretta vulgaris (десятисуточную).
В.2 Условия подготовки к тестированию Daphnia magna Straus.
В.2.1 Оборудование и процедура получения молоди
Для тестирования используют околосуточных Daphnia magna Straus (синхронизированная культура),
которых получают в лаборатории следующим способом.
- в стакан вместимостью 500 смлс культивационной водой из емкости с маточной культурой помеща
ют 40 шт. взрослых особей Daphnia magna Straus, кормят по В 2.3 и выдерживают 1— 2 сут.
П р и м е ч а н и е — Культивационную воду готовят по 5.3.2 или приложению Е;
- через одни сутки новорожденные организмы, по мере их выклева в течение суток, отбирают трубоч
кой и помещают в чистый стакан с культивационной водой:
- затем околосуточную молодь (синхронизированную культуру) используют в эксперименте.
В.2.2 Регулирование плотности популяции
Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции тест-организмов при подготовке моло
ди к тестированию.
В течение 1— 8 ч накопившиеся новорожденные тест-организмы переносят пипеткой вотдельный сосуд с
культивационной водой и используют для тестирования.
Предварительную адаптацию к культивационной воде нвонатов Daphnia magna Straus не проводят.
В. 2.3 Кормление
Околосуточную молодь Daphnia magna Straus при тестировании не кормят.
В.З Условия культивирования маточной культуры Daphnia magna Straus по методу А
8.3.1 Для культивирования маточной культуры Daphnia magna Straus используют небольшие стеклянные
емкости (например, кристаллизаторы) объемом 1-3дм"1, плотность посадки 20-25 особей на 1дм\
24