ГОСТ 32475-2013
дней. Готовят основной раствор (в деоксидированиой воде) выбранного референтного вещества так
же. как и для исследуемого вещества, и приводят pH к(7
±
0.2). если это необходимо.
3.8 Контроль ингибирования (при необходимости)
Для получения информации о токсичности исследуемого вещества для анаэробных
микроорганизмов и подбора наиболее подходящей тестовой концентрации добавляют исследуемое и
стандартное вещества в сосуды с тестовой средой (см. 3.4.1). каждое в установленной ранее
концентрации соответственно (см. 3.6 и 3.7 и [12]).
3.9 Сброженный осадок
3.9.1 Сброженный осадок отбирают из реактора очистных сооружений, предназначенных
преимущественно для очистки бытовых сточных вод. Свойства осадка должны быть полностью
изучены, справочная информация должна быть представлена (см. 4.9). Если планируется
использовать адаптированную посевную культуру, можно использовать сброженный осадок из
промышленной установки очистки сточных вод. Для сбора осадка используют сосуды с широким
горлом из полиэтилена высокой плотности или подобного материала, который может расширяться.
Добавляют осадокпримернона1 смгорлышкаи плотнозакрывают,желательно с
предохранительным клапаном. После транспортирования в лабораторию, собранный осадок может
использоваться непосредственно или помещаться в лабораторную установку. Из сосудов с осадком
очень аккуратно выпускают биогаз. Кроме того, полученный в лаборатории анаэробный осадок может
использоваться в качестве источника посевной культуры, но его спектр активности, возможно, может
быть нарушен.
Примечание-С&роженныйосадоквыделяет горючиегазы, которые обладают пожаро и
взрывоопасностью: он также содержит потенциально патогенные организмы, поэтому следует принимать
надлежащие меры предосторожности при работе с осадком. Из соображений безопасности для сбора осадка не
используют стеклянные сосуды.
3.9.2 Для снижения образования газа и влияния контрольных проб может проводиться
предварительное сбраживание осадка. Если предварительное сбраживание необходимо, осадок
подвергают брожению без добавления каких-либопитательных веществ или субстрата при
температуре (35
±
2) °С в течение семи дней. Было установлено, что предварительное сбраживание в
течение примерно пяти дней, как правило, дает оптимальное снижение образования газа в
контрольных пробах без неприемлемого увеличения лаг-фазы или инкубационного периода во время
теста или потери активности по отношению к некоторым исследуемым веществам.
3.9.3 Для исследования веществ, которые плохо или предположительно плохо поддаются
биологическому разложению, может проводиться предварительное испытание по воздействию
осадка на исследуемое вещество для получения наиболее адаптированной посевной культуры. В
таком случае добавляют исследуемое вещество в концентрации (в расчете на органический углерод)
от 5 до 20 мг/л сброженного осадка и инкубируют в течение двух недель. Перед использованием
осадок для предварительного испытания тщательно промывают (см. 3.10). В протоколе испытаний
указывают условия предварительного испытания.
3.10 Инокулюм (прививочный материал)
Осадок промывают (см. 3.9) непосредственно перед использованием, чтобы уменьшить
концентрацию НУ до значения менее 10 мг/л в конечной суспензии. Затем центрифугируют в
герметичных тубах (например. 3000 г в течение 5 мин) и сливают надосадочную жидкость.
Суспендируют полученный осадок в деоксидированиой среде (см. 3.4), повторно центрифугируют
суспензию и сливают супернатант. Если количество НУ не было достаточно снижено, процедура
промывки осадка может проводиться еще не более двух раз. Эта процедура не оказывает
отрицательного влияния на микроорганизмы. В заключение, суспендируют осадок в необходимом для
тестовой среды объеме и определяют общую концентрацию сухого остатка (например, см. [15]).
Конечное общее содержание сухого остатка в тестовых сосудах должно быть в диапазоне от 1 до 3 г/л
(или около 10 % от содержания в неразбавленном осадке). Указанные операции проводят таким
образом, чтобы осадок имел минимальный контакт с кислородом (например, использование
атмосферы азота).
3.11 Порядок проведения испытания
Выполняют следующие начальные процедуры с использованием техник для сохранения
минимального контакта между сброженным осадком и кислородом, например, может быть
необходимо использовать для работы перчаточную камеру с атмосферой азота и/или обработку
сосудов азотом (см. [4]).
5