ГОСТ 32475-2013
-аммония хлорид (NH^CI): 0.53 г;
-кальция хлорид дигидрат (СаС12»2Н20): 0,075 г;
-магния хлорид гексагидрат (MgCI2*6H20): 0,10 г;
-железа (II) хлорид тетрагидрата (FeCI2*4H20): 0,02 г;
-резазурин (индикатор кислорода): 0.001 г;
-натрия сульфид наногидрат (Na2S»9H20): 0,10 г,
-основной раствор микроэлементов (по выбору, см. 3.5): 10 мл;
-довести водой, не содержащей кислород (см. 3.5), до 1 л.
П р и м е ч а н и е - Дляобеспечениянеобходимоговосстановительногопотенциаласледует
использовать свежеприготовленный сульфид натрия или промывать и высушивать его перед использованием.
Испытания могут проводиться без использования перчаточной камеры (см. 3.11). В этом случае
конечная концентрация сернистого натрия в среде должна быть увеличена до 0,20 г Na2S*9H20 на 1 л.
Также через мембрану закрытых тестовых сосудов из соответствующего анаэробного основного
раствора можно добавлять сульфид натрия, поскольку данная процедура снизит риск окисления.
Сульфид натрия может быть заменен на цитрат титана (III), который добавляют через мембрану
закрытых тестовых сосудов в конечной концентрации от 0.8 до 1.0 ммоль/л. Цитрат титана (III)
является высокоэффективным и малотоксичнымвосстановительным агентом, который готовят
следующим образом: растворяют 2,94 г дигидрата цитрата тринатрия в 50 мл воды, не содержащей
кислород (в результате получают раствор 200 ммоль/л), и добавляют 5 мл 15 об.% раствора хлорида
титана (III). Нейтрализуют до pH (7
±
0,2) раствором минеральной щелочи и переносят в подходящий
сосуд в потоке азота. Концентрация цитрата титана (III) в данном основном растворе составляет 164
ммоль/л.
3.4.2Смешивают компоненты тестовой среды, за исключением восстановительного агента
(сульфида натрия/цитрата титана), и барботируют раствор азотом в течение приблизительно 20 мин
непосредственно перед использованием для удаления кислорода. Затем добавляют необходимый
объем свежеприготовленного раствора восстановительного агента (в деоксидированной воде)
непосредственно перед использованием среды. При необходимости приводят pH среды
разбавленным раствором минеральной кислоты или щелочи к (7
±
0.2).
3.5 Основной раствор микроэлементов (по выбору)
Рекомендуется для улучшения процесса анаэробного разложения добавлять в тестовую среду
следующие микроэлементы, особенно при использовании низких концентраций (например, 1 г/л)
инокулята по (1):
-марганца хлорид тетрагидрат (МпС12*4Н20): 50 м;
-борную кислоту (НзВОз): 5 мг;
-цинка хлорид (ZnCI2): 5 мг;
-меди(И) хлорид (СиС12) 3 мг;
-динатрия молибдат дигидрат (Na2Mo04*2H20): 1 мг;
-кобальта хлорид гексагидрат (СоС12*6Н20): 100 мг:
-никеля хлорид гексагидрат (NiCI2»6H20): 10 мг;
-динатрия селенит (Na,Se03): 5 мг.
Довести водой, не содержащей кислород (см. 3.3). до 1 л.
3.6 Исследуемое вещество
Добавляют исследуемое вещество в виде основного раствора, суспензии, эмульсии или
непосредственно в твердом или жидком виде или в абсорбированном на фильтре из стекловолокна
для обеспечения концентрации органического углерода не более 100 мг/л. Если используют
основные растворы, готовят соответствующий водный раствор (см. 3.5) (в деоксидированной воде)
такой крепости, чтобы добавленный объем составлял менее 5 % от общего объема реакционной
смеси. Приводят pH основного раствора к (7
±
0,2), если это необходимо. Для исследуемых веществ,
которые плохо растворимы в воде. см. [13]. Если используется растворитель, готовят
дополнительную контрольную пробу с растворителем - в инокулированную среду добавляют только
растворитель. Следует избегать использования органических растворителей, которые ингибируют
образование метана, таких как хлороформ и тетрахлорид углерода.
П р и м е ч а н и е - При работе с токсичными тестируемыми вещества или теми, чьи свойства не
известны, следует соблюдать осторожность.
3.7 Референтные вещества
Референтные вещества, такие как бензоат натрия, фенол и полиэтиленгликоль 400, успешно
применяются для проверки процедуры и демонстрируют более, чем 60 % разложения в течение 60
4