ГОСТ 32475-2013
3.12 Подготовка тестовых и контрольных проб
3.12.1 Готовят, как минимум, три экземпляра тестовых сосудов (см. 3.1) для исследуемого
вещества, контрольной пробы, референтного вещества, контроля ингибирования (по выбору) и
контроля давления в камерах (процедура по выбору) (см. 2.2, 2.6 и 3.7). Могут быть также
подготовленыдополнительныесосудысцелью оценкипервичнойбиоразлагаемостис
использованием специальных анализов исследуемого вещества. Тот же набор контрольных проб
может использоваться для нескольких исследуемых веществ в одном и том же испытании до тех пор,
пока обьем незаполненного пространства остается постоянным.
3.12.2 Готовят разбавленную посевную культуру, например, с помощью пипетки с широким
горлом. Добавляют аликвоты хорошо перемешанной посевной культуры (см. 3.10) так. что общая
концентрация взвешенных веществ одинакова во всех сосудах (от 1 до 3 г/л). Добавляют основные
растворы исследуемого и стандартного веществ после корректировки pH до (7
±
0.2). при
необходимости. Исследуемое и стандартное вещества должны быть добавлены наиболее
подходящим способом (см. 3.6).
3.12.3 Тестовая концентрация органического углерода, как правило, должна составлять от 20 до
100 мг/л (см. 3.1). Если исследуемое вещество является токсичным, тестовая концентрация должна
быть снижена до 20 мг углерода на литр или даже меньше, если должна быть оценена
только начальная биоразлагаемость с помощью конкретных анализов. Следует отметить, что
изменчивость результатов испытаний увеличивается при более низких тестовых концентрациях.
3.12.4 Для холостых проб вместо исходного раствора, суспензии или эмульсии добавляют
шприцем эквивалентное количество исследуемого вещества. Если исследуемое вещество вводили с
использованием фильтров из стекловолокна или органических растворителей, добавляют в пробы
фильтр или эквивалентный объем растворителя, который испаряют. Готовят дополнительную пробу с
исследуемым веществом для измерения pH. При необходимости, приводят pH к (7
±
0.2) небольшим
количеством разбавленной минеральной кислоты или щелочи. Такие же количества нейтрализующих
агентов необходимо добавить во все тестовые сосуды. Нейтрализующие агенты не добавляют, если pH
основных растворов исследуемого и референтного веществ уже были приведены к нужному
значению (см. 3.6 и 3.7). При оценке начальной биоразлагаемости соответствующие пробы отбирают из
сосудов для контроля pH или из дополнительного тестового сосуда и измеряют концентрацию
исследуемого вещества с помощью специальных анализов. Магнитные мешалки могут быть
добавлены во все сосуды, если реакционную смесь необходимо перемешивать (не обязательно).
3.12.5 Общий объем жидкости V, и объем свободного пространствакоторые должны быть
одинаковы во всех сосудах, измеряют и регистрируют их значения. Каждый сосуд должен быть
закрыт мембраной и перенесен из перчаточной камеры (см. 3.12) в инкубатор (см. 3.1.1).
3.13 Нерастворимые тестируемые вещества
Взвешенные количества плохо растворимых в воде веществ переносят непосредственно в
подготовленные сосуды. Когда необходимо использование растворителей (см. 3.6), переносят
раствор или суспензию исследуемого вещества в пустые сосуды. Если возможно, растворитель
испаряют, пропуская газообразный азот через сосуды, а затем добавляют другие ингредиенты, в том
числе, разбавленный осадок (см. 3.10) и деоксидированную воду при необходимости. Также готовят
дополнительную контрольную пробу с растворителем (см. 3.6). Для других способов добавления
нерастворимых веществ см. [13]. Жидкие исследуемые вещества можно добавлять с помощью
шприца в полностью подготовленные закупоренные сосуды, если предполагается, что начальное
значение pH не превышает (7
±
1). в противном случае, вещество дозируют, как описано выше (см.
3.6).
3.14 Инкубация и измерения давления газа
3.14.1Подготовленные сосуды инкубируют при (35
±
2) °С в течение одного часа для
достижения равновесия и выпускают избыток газа в атмосферу, например, встряхивая по очереди
каждый сосуд со вставленной через мембрану иглой манометра (см. 3.1.3) и открывая клапан, пока
показания манометра не установятся на нуле. Если на этой стадии или при выполнении
промежуточных измерений давление газовой фазы меньше атмосферного, для восстановления
атмосферного давления должен быть введен азот. Закрывают клапан (см. 3.1.3) и продолжают
инкубировать в темноте, обеспечивая поддержание температуры сбраживания для всех частей
сосуда. По прошествии от 24 до 48 ч после инкубации сосуды обследуют. Сосуды исключают, если их
содержимое имеет выраженное розовое окрашивание надосадочной жидкости, т. е. если резазурин
(см. 3.4.1) изменил цвет, что указывает на присутствие кислорода (см. 4.7). Хотя система может быть
толерантна к небольшому количеству кислорода, более высокие концентрации могут серьезно
тормозить ход анаэробного биоразложения. Исключение одного случайного сосуда из набора из трех
6