ГОСТ 32433—2013
испарением растворителя, при использовании, и прямом добавлении извест ных количеств вещест
ва.
5Добавление известного объема раствора исследуемого вещества в легко летучем раство
рителе в пустой т ест овый сосуд, с последующ им испарением растворителя.
Материалы или растворители, используемые в способах 3, 4 и 5, должны быть исследованы
на лю бое ингибирующее или стимулирующ ее воздействие на активность микроорганизмов (пункт
5.3).
4.9 Референтное (стандартное) вещество
Готовят основной раствор (растворимого) стандартного вещества в воде (пункт 3.3) в концен
трации предпочтительно в 100 раз больше, чем окончательная концентрация, которая будет исполь
зоваться (20 мг С/л) в испытании.
4.10 Проверка на ингибирование
Исследуемые вещества часто не демонстрируют значительного разложения в условиях испы
тания на биоразложенио. Одной из возможных причин является то. что исследуемое вещество может
быть ингибитором инокулята в концентрации, используемой в испытании. Проверка на ингибирование
может быть включена в структуру испытания для облегчения идентификации (в ретроспективе) инги
бирования. как возможной причины или способствующего фактора низкого биоразложения. В альтер
нативном случае проверка на ингибирование может исключить подобное влияние и продемонстриро
вать. что нулевое или незначительное ухудшение объясняется исключительно неподатливостью ис
следуемого вещества к микробиологическому воздействию в условиях испытания. Для получения
информации о токсичности исследуемого вещества для (аэробных) микроорганизмов готовят раствор
в тестовой среде, содержащей исследуемое вещество и стандартное вещество (пункт 3.5). каждое в
добавленной тестовой концентрации, соответственно (пункты 4.8 и 4.9).
4.11 Прививочный материал (инокулят)
4.11.1Инокулят может быть получен из различных источников: активный ил; сточные воды
(нехлорированные): поверхностные воды и почвы; или из смеси данных источников [20]. Биологиче
ская активность источника должна быть проверена с помощью стандартного вещества. Независимо от
источника, микроорганизмы, ранее подвергавшиеся воздействию исследуемого вещества, не
должны использоваться, если процедура будет использоваться в качестве теста на биоразлагае
мость.
П р и м е ч а н и е - Активный ил и сточные воды, содержащие патогенные микроорганизмы, необхо
димо использоватьс осторожностью.
4.11.2 Исходя из имеющегося опыта оптимальныйобъеминокулята должен:
- бытьдостаточнымдля обеспечения необходимойдеятельности микроорганизмов:
- обеспечивать разложениестандартноговещества до установленногоуровня (пункт 6.5);
- образовывать от 102до 105 копониеобразующихединиц на миллилитрв конечнойсмеси:
- давать концентрацию 4 мг/л взвешенных веществ в конечной смеси при использовании активного ила;
концентрации до 30 мг/л также могут использоваться, но это может значительно увеличить выделение СО- в
контрольныхпробах[26];
- составлять менее 10 % от исходной концентрации органического углерода, вносимого с исследуемым
веществом;
- составлятьот 1доЮ мл инокулята на 1литр исследуемого раствора.
4.12 Активный ил
4.12.1 Свежий активный ил отбирается из аэротенка станции очистки сточных вод или лабо
раторной установки, перерабатывающей преимущественно бытовые сточные воды. При необходимо
сти. крупные частицы можно удалить путем просеивания (например, используя 1 мм2 сито), до ис
пользования ил содержат в аэробных условиях.
4.12.2 Кроме того, после удаления крупных частиц ил отстаивают или центрифугируют (на
пример. 1100 g (11000 м/с2) в течение 10 минут). Удаляют поверхностную жидкость. Ил можно про
мыть в минеральном растворе. Концентрированный ил суспендируют в минеральной среде до кон
центрации от 3 до 5 г взвешенных твердых частиц/л. Затем проводят аэрацию в течение необходимо го
времени.
4.12.3 Образец ила необходимо отбирать на станции очистки сточных вод. работающей в
стандартном режиме. Если ил отбирают на станции интенсивной очистки, или он может содержать
ингибиторы, его необходимо промыть. После тщательного перемешивания ре-суспендированный ил
осаждают или центрифугируют, поверхностную жидкость удаляют и повторно суспендируют промы
тый ил в минеральной среде. Данную процедуру повторяют, пока ил не будет полностью очищен от
избытка субстрата или ингибитора.
5