ГОСТ 32433—2013
сточных вод (пункт 4.13) к 900 мл среды из минеральных солей (пункт 4.5) и доводят до 1 литра сре
дой.
5.3 Подготовка сосудов
5.3.1 Аликвоты привитой среды разливают в параллельные сосуды для достижения соотно
шения объема свободного пространства к объему жидкости 1:2 (например, добавляют 107 мл в 160
мл сосуды). Могут использоваться другие соотношения, но с учетом пункта 11. При использовании
любого типа посевной культуры, необходимо обеспечить надлежащее перемешивание привитой сре
ды для ее равномерного распределения в тестовых сосудах.
5.3.2 Готовят следующий набор сосудов (пункт 4.4):
а) тестовые сосуды (обозначают как FT), содержащие исследуемое вещество;
б) контрольные сосуды (обозначают как FB). содержащие только тестовую среду и инокулят;
любые химические вещества, растворители, агенты или фильтры из стекловолокна, используемые
для введения исследуемого вещества в испытательные сосуды, также необходимо добавлять:
в) сосуды (обозначают как FC). содержащие стандартное вещество, для проверки процедуры
испытания;
г) при необходимости, сосуды (обозначают как FI). содержащие исследуемое и стандартное
вещества в тех же концентрациях, как в сосудах FT и FC соответственно;
д) сосуды (обозначают как FS) для проверки возможного абиотического разложения как 1 ♦ 50
мг/л HgCI2или стерилизованных каким -либо другом способом (например, в автоклаве).
5.3.3 Растворимые в воде исследуемые вещества и стандартные вещества добавляют в виде
основных водных растворов (пункты 4.9. 4.10. 4.11) для получения концентрации от 10 до 20 мг С/л.
5.3.4 Нерастворимые исследуемые и нерастворимые стандартные вещества добавляют в со
суды различными способами (пункт 4.8) в зависимости от природы вещества, до или после добавле
ния привитой среды, в зависимости от метода обработки данного вещества. Если используется одна
из процедур, приведенных в пункте 4.8. то контрольные сосуды FB (пункт 5.3.2) следует рассматри
вать таким же образом, но за исключением исследуемого или стандартного веществ.
5.3.5 Летучие исследуемые вещества должны вводиться в герметически закрытые сосуды
(пункт 5.3.8) с помощью микрошприцев. Доза рассчитывается на основании введенного объема и
плотности вещества.
5.3.6 Вода должна добавляться в сосуды при необходимости, для достижения одинакового
объема жидкости в каждом сосуде. Необходимо убедиться, что соотношение свободного пространст ва
и жидкой фазы (обычно 1:2) и концентрация исследуемого вещества таковы, что в свободном про
странстве доступно количество кислорода, достаточное для обеспечения полного биоразложения.
5.3.7 Затем все сосуды закрывают, например, с бутилкаучуковыми пробками и алюминиевыми
колпачками. Летучие исследуемые вещества должны быть добавлены на данном этапе (пункт 5.3.4).
Для проведения контроля снижения концентрации РОУ в тестовом растворе, анализа начальной кон
центрации НУ (стерильные контрольные пробы, пункт. 5.3.2) или других показателей из тестового со
суда отбирают соответствующую пробу. Тестовые сосуды и их содержимое затем исключаются из
испытания.
5.3.8 Герметически закрытые сосуды размещают на ротационном шейкере (15 г) со скоростью
встряхивания, достаточной для хорошего перемешивания содержимого бутылок и поддержания сус
пензии (например, от 150 до 200 оборотов в минуту), и инкубируют в темноте при температуре 20 вС,
поддерживаемой на уровне ± 1 *С.
5.4 Отбор проб
Способ отбора проб будет зависеть от лаг-фазы и кинетической скорости биоразложения ис
следуемого вещества. Сосуды исключают из испытания в день отбора пробы, который должен проис
ходить. как минимум, один раз в неделю или чаще (например, два раза в неделю), если требуется
полная кривая биоразложения. Для этого необходимое количество параллельных сосудов, представ
ляющих FT. F
b
и
Fc,
и
.
если используются. F, и Fs, извлекают из шейкера (пункт 5.3). Испытание обыч но
проводят в течение 28 дней. Если кривая биоразложения показывает, что плато-фаза была дос тигнута
ранее, чем через 28 дней, испытание может быть закончено раньше. Отбирают пробы из пяти сосудов,
оставшихся на 28 день испытания, для анализа и используют результаты для расчета дове рительного
интервала или коэффициента вариации для биоразложения в процентах. Пробы из сосу дов для
проверки на ингибирование и для абиотического разложения не должны отбираться так же часто, как
из других сосудов, достаточно отбирать пробы в первый и 28 день испытания.
5.5 Анализ содержания неорганического углерода (НУ)
5.5.1Образование С02 в сосудах определяется путем измерения увеличения концентрации
неорганического углерода (НУ) в период инкубации. В данном испытании для измерения количества
образовавшегося НУ рекомендуется использовать два метода, описание которых приведено ниже.
7