ГОСТ 32541-2013
7 Процедура
7.1 Условия воздействия
7.1.1 Продолжительность
Эксперимент должен начаться в течение 30 минут после оплодотворения икры. Эмбрионы
помешают в тестовый раствор реактива сразу или как можно скорее после начала стадии деления
бластодиска и в любом случае перед началом стадии гаструлы. Для икры, полученной от
коммерческого поставщика, не представляется возможным начать испытания немедленно после
оплодотворения. Таким образом, чувствительность испытания может пострадать из-за запаздывания
начала испытания. Испытание должно быть инициировано в течение восьми часов после
оплодотворения. Поскольку личинки не питаются во время периода желточного мешка, испытание
должно быть завершено непосредственно перед тем. как желточный мешок полностью рассосется
или прежде, чем начнется смерть от голодания в контрольных группах. Продолжительность теста
будет зависеть от вида. Несколько рекомендуемых продолжительностей тестаданы в приложениях Би В.
7.2 Загрузка
Количество оплодотворенной икры в начале теста должно быть достаточным, чтобы отвечать
статистическим требованиям. Икра должна быть случайным образом распределена порциями по 30
оплодотворенных икринок (насколько это возможно, так как может быть трудно получить равные
порции для некоторых видов), между тремя репликациями для каждой концентрации. Уровень
загрузки (биомасса на объем испытуемого раствора реактива) должна быть достаточно низкой, чтобы
концентрация растворенного кислорода, на уровне не менее 60 % от насыщения, могла быть
поддержана без аэрирования. Для проточного теста рекомендуют уровень загрузки не более 0.5 г/л в 24
часа и не более 5 г/л раствора [2].
7.3 Свет и температура
Фотопериод и температура воды должны соответствовать требованиям содержания видов
(см. приложения Б и В).
7.4 Испытательные концентрации
7.4.1 Обычно готовят пять концентраций испытательного вещества, с кратностью разбавления
3.2. Кривая, связывающая LC50 с периодом воздействия в остром эксперименте, должна помочь при
выборе диапазона испытательных концентраций. Использование меньше пяти концентраций,
например, в тесте на предельное содержание и более узком интервале концентрации, могут
применяться в некоторых обстоятельствах. Если используется меньше пяти концентраций, должна
быть проведена проверка. Концентрации вещества выше девяноста шестичасового LC50 или 100 мг/л
не применяется. Вещества не должны тестироваться выше их предела растворимости в воде.
7.4.2 Когда используются средства повышения растворимости (пункт 6.6.1), конечная
концентрация вспомогательного вещества в тестовом аквариуме не должна быть больше, чем 0,1
мл/л. и должна быть одинаковой во всех аквариумах.
7.5 Контрольные группы
Один контроль с разбавляющей водой (желательно в двух повторностях), а также, если
необходимо, один контроль веществом, повышающим растворение,должен быть добавлен к
тестовому ряду.
7.6 Частота аналитических определений и измерений
7.6.1 Во время испытания концентрации испытательного вещества распределяют равномерно
(пункт 7.6.2, п.7.6.3).
7.6.2 В полустатическом тесте, где концентрация испытательного вещества, как ожидают,
остается в пределах
±
20 % от номинала (то есть в пределах диапазона от 80 % до 120 % (пункт 4.1,
п.6.6.2); рекомендуют анализировать, как минимум самые высокие и самые низкие тестовые
концентрации, сразу после приготовления и непосредственно перед обновлением трижды, оставляя
равные промежутки между анализами (то есть исследования должны быть сделаны на выборке из
того же самого свежеприготовленного раствора). В случае, если концентрация тестируемого
вещества не остается в пределах
±
20 % от номинала (на основе данных о стабильности вещества),
необходимо анализировать все тестируемые концентрации после приготовления и перед
обновлением о том же самом режиме (по крайней мере, три раза). Определение тестируемых
концентраций вещества перед обновлением должно быть выполнено для каждого сосуда каждой
тестируемой концентрации. Определения должны быть сделаны не реже, чем раз в семь дной.
Рекомендуется основывать результаты на взвешенных концентрациях. Однако, если возможно
продемонстрировать, что концентрация тестируемого вещества в растворе оставалась в пределах
±
4