ГОСТ 32541-2013
Приложение А
(рекомендуемое)
Руководство по проведению испытания на токсичность на эмбрионах и
личинках Данио Рерио (Brachydanio rerio)
А.1 Введение
А.1.1 Данио Рерио обитает в районе Коромандельского побережья Индии, где населяет
потоки с быстрым течением. Это - обычная аквариумная рыбка семейства карповых, и информация о
методах ее содержания и разведения может быть найдена в стандартных справочниках по
тропическим рыбам. Ее биология и использование в исследовании рыбоводства было рассмотрено
Laale [1).
А. 1.2 Рыба редко превышает 45 мм в длину. Тело является цилиндрическим с семью -
восемью темно-синими горизонтальными серебристыми полосами. Эти полосы соединяются с
хвостовыми и анальными плавниками. Спина является коричнево-зеленой. Самцы меньше самок.
Самки более светлые и брюшко увеличено, особенно перед нерестом.
А.1.3 Взрослые рыбы в состоянии вынести большие колебания температуры и жесткости.
Однако, чтобы получить здоровых рыб. которые производят икру хорошего качества, должны быть
созданы оптимальные условия.
А.1.4 Во время нереста самцы преследуют и прижимают самку, выдавливая и оплодотворяя
икру. Прозрачные и нелипкие икринки падают на дно, где они могут быть съедены родителями.
Нерест связан с освещением. Обычно он происходит в первые часы после рассвета.
А.1.5 Самка может производить несколько сотен икринок в недельные интервалы.
А.2 Условия содержания родительских особей, разведение и стадии развития
А.2.1 Выберите необходимое количество здоровой рыбы и содержите ее в подходящих
условиях (например, как указано в приложении 5) в течение, по крайней мере, двух недель до
намеченного нереста. Рыбе нужно дать отнереститься, по крайней мере, один раз перед
использованием икры в тесте. Плотность посадки рыб в течение этого периода не должна превышать
один грамм рыбы на литр. Регулярная подмена воды или использование системы фильтрации делает
возможным более высокую плотность посадки. Температура в нерестовиках должна поддерживаться
равной (25
±
2) °С. Рыбу нужно держать на разнообразной диете, которая может состоять из,
например, коммерческого сухого корма, живых, недавно выведенных. Artemia, хирономид, дафний,
мучных червей (Enchytraetdae).
А.2.2 Две процедуры описывают ниже в общих чертах, как на практике получить здоровую
оплодотворенную икру для теста:
- 8 самок и 16 самцов помещаются в пятидесяти литровый аквариум с разбавляющей водой,
экранированный от прямого света и оставляют в максимальном покое, по крайней мере, 48 часов.
Нерестовый лоток помещают на дно аквариума за день перед началом нереста. Нерестовая тарелка
представляет собой рамку (плексиглассовую или из другого подходящего материала) от 5 до 7 см
высотой с присоединенной сверху сеткой с ячейками от 2 до 5 мм. и от 10 до 30 мкм тонкой сеткой в
основании. Многие «нерестовые кусты», состоят из некрученой нейлоновой веревки, присоединённой к
крупноячеистой сети. После того, как рыбы выдерживаются в темноте в течение 12 часов, включают
слабый свет, который инициирует нерест. Спустя два - четыре часа после нереста, нерестовая
тарелка удаляется и икра собирается. Нерестовая тарелка предотвращает поедание икры рыбами и в то
же время облегчает сбор. Группа рыбы должна отнереститься, по крайней мере, один раз перед тем.
как использовать икру в тесте.
- Пять - десять самцов и самок отсаживают отдельно, по крайней мере, за две недели до
намеченного нереста. Через пять - десять дней брюшные полости самок увеличатся и станут
заметны половые бугорки. У самцов бугорки будут незаметны. Нерест выполняется в нерестовые
лотки (как описано выше). Аквариум заполняют водой разбавления, так. чтобы высота воды была
выше нерестовой тарелки на пять - десять сантиметров. Одну самку и двух самцов отсаживают в
нерестовый аквариум за день перед нерестом. Температуру воды постепенно увеличивают на градус
выше температуры содержания. Выключают свет и аквариум оставляют в максимальном покое.
Утром включают слабый свет, который инициирует нерест. Через два - четыре часа рыб удаляют, а
икру собирают. Если необходимы большие количества икры, чем может дать одна самка, можно
установитьпараллельнонескольконерестовыхаквариумов.Делаютзаписьуспешного
воспроизводства индивидуальных самок перед тестом (размер нереста и качество), самых
плодовитых самок отбирают для размножения.
8