ГОСТ 32541-2013
А.2.3 Икру переносят в тестовый сосуд с помощью стеклянной трубки (внутренний диаметр не
меньше 4 мм). Количество воды, захваченной с икринкой при переносе должно быть, как можно
меньше. Икра тяжелее воды и выливается из трубки. Следует соблюдать осторожность при переносе,
чтобы предотвратить контакт икринки (и личинки) с воздухом. Должно быть выполнено
микроскопическое исследование выборки(ок). чтобы гарантировать отсутствие неравномерности в
первых стадиях развития. Дезинфекция икры недопустима.
А.2.4 Смертность икры максимальна в течение первых 24 часов после оплодотворения. В
течение этого периода часто наблюдают смертность от 5 % до 40 %. Икра погибает в результате
неудачного оплодотворения или отсутствия развития. Качество загрузки икры зависит от самки,
поскольку некоторые самки последовательно производят икру хорошего качества, а другие нет. Также
уровень развития и уровень вылупления изменяется от одного нереста к другому. Выживаемость
успешно оплодотворенной икры и личинок с желточным мешком обычно выше 90 процентов. При 25 °С
личинки вылупляются через пять дней после оплодотворения, желточный мешок рассасывается
приблизительно спустя тринадцать дней после оплодотворения.
А.2.5 Эмбриональное развитие было хорошо изучено Hisaoka и Battle (2]. Из-за прозрачности
икринок и предличинок можно наблюдать развитие рыбы и наличие пороков развития.
Приблизительно через четыре часа после нереста, неоплодотворенные яйца можно отличить от
оплодотворенных [3]. Для этого икру и личинки помещают в небольшой сосуд и изучают под
микроскопом.
А.2.6 Условия тестирования, которые относятся к ювенильной стадии, перечислены в
приложении Б. Оптимальные значения pH и жесткости воды разбавления составляют 7.8 и 250 мг
СаСОт/л соответственно.
А.З Вычисления и статистика
Предлагается двухступенчатый подход. Во-первых, данные по смертности, аномалии
развития и время вылупления анализируют статистически. Тогда выявленные концентрации, которые
не оказывают никаких неблагоприятных эффектов на любой из этих трех параметров и длина тела
оценивают статистически. Этот подход желателен, так как ядовитое вещество может выборочно
убить мальков, задержать вылупление и стимулировать серьезные пороки развития, таким образом
приводя к искажениям параметра длины. Кроме того, примерно такое же количество рыбы
измеряется перед обработкой, гарантируя достоверность полученных статистических данных.
А.4 Определение LC50 И ЕС50
Вычисляют процент выживших икринок и личинок и корректируют смертность в контрольных
группах в соответствии с уравнением Эбботта (Abbott) (4):
где Р - откорректированное выживание. %;
Р’ - выживание, наблюдаемое на тестируемой концентрации. %;
С - выживание в контроле, %.
Если возможно. LC50 определяют подходящим методом в конце испытания.
Если в статистическую величину ЕС50 включают морфологические расстройства, желательно,
использовать руководство Stephan [5].
А.5 Оценка LOEC И NOEC
Целью теста на эмбрионах и личинках является установить наименьшую действующую
концентрацию, то есть определить LOEC. Поэтому должны быть использованы множественные
процедуры сравнения (6].[7).(81.[9),(10).
(А.1)
9