ГОСТ 32371-2013
Выделения собираются во время периода экспозиции, до 24 часов после первоначального
контакта вещества с кожей, а затем ежедневно до окончания эксперимента. В обычном случае
достаточным может быть трехразовый сбор экскрементов, некоторые задачи, связанные с
особенностями тестируемой пробы или существующие кинетические данные могут потребовать
другие или дополнительные временные точки для исследования.
По окончании периода экспозиции с каждого животного удаляют защитную повязку, которую
сохраняют отдельно для анализа. Обработанную кожу всех животных промывают как минимум три
раза с моющим веществом и подходящей щеткой. Необходимо не допускать загрязнения других
частей тела животного. Моющее вещество должно быть стандартным, используемым для обычной
гигиены (например, мыльный раствор в воде).
В конечном итоге кожа должна быть высушена. Все щетки и моющие приборы должны быть
сохранены для анализа. Свежая повязка должна быть наложена для защиты обработанного места у
тех животных, из которых формируется более поздняя временная группа, до их помещения в клетки.
4.2 Процедура умерщвления животных
Каждую группу животных необходимо умерщвлять в установленное время, а их кровь должна
собираться для анализа. Защитное устройство или повязку сохраняют для дальнейшего анализа.
Кожа с места нанесения вещества и такое же количество необработанной кожи каждого животного
собирают отдельно для анализа. Место нанесения вещества может быть от препарировано с
выделением отдельно рогового слоя и нижележащего эпидермиса для получения большей
информации о распространении исследуемого вещества. Выявление распространения вещества в
течение времени после периода экспозиции должно показывать изменение исследуемого вещества в
роговом слое. Для облегчения фракционирования кожи (после последней промывки кожи и
умерщвления животного) снимают каждый защитный слой.
Кожу, с места нанесения вещества, срезают с животного кольцеобразным срезом окружающей
кожи и закрепляют на доске. Полоску клеящейся ленты накладывают на поверхность кожи легким
надавливанием, а затем ленту удаляют вместе с частью рогового слоя. Последующие полоски ленты
накладывают до тех пор. пока лента не перестанет приклеиваться к поверхности кожи, что
свидетельствует об удалении рогового слоя полностью. Для каждого животного, все полоски
собираются в один контейнер, куда добавляется дигестант для растворения рогового слоя. Все
потенциальные целевые ткани могут быть удалены для проведения отдельных измерений до того,
как остатки тела животного будут исследованы на остаточную дозу. Остатки тел всех животных
сохраняют для анализа. Обычно, достаточно проведения общего анализа. Органы-мишени также
могут быть извлечены для проведения отдельного анализа (при наличии показаний других
исследований). Моча, присутствующая в мочевом пузыре в момент умерщвления животного, должна
быть добавлена к предыдущему сбору. После сбора экскреций из метаболических клеток в момент
умерщвления, все клетки и их ловушки следует промыть соответствующим растворителем. Прочее
потенциально загрязненное оборудование должно быть исследовано таким же образом.
4.3 Проведение анализа
Во всех исследованиях должны быть получены адекватные результаты, то есть средние
значения радиоактивной метки (уровень проникновения) должно составлять (100±10)%. Результаты,
не попадающие в данный диапазон, следует обосновать. Количество дозы в каждом образце следует
проанализировать с помощью соответствующей обоснованной процедуры.
5 Данные
Для каждого животного должны быть проведены следующие измерения (для каждого периода
времени каждого тестируемого вещества и/или метаболита):
количество вещества, полученное с защитной повязки;
-количество вещества, которое может быть получено с кожи;
-количество вещества на или в коже, которое не может быть смыто;
-количество вещества в анализе крови;
-содержание вещества в выделениях и выдыхаемом воздухе (при необходимости);
-вещество, оставшееся в тканях или органах, оставленных для отдельного анализа.
В дополнение к индивидуальным данным, должны быть представлены средние значения по
всей группе отбора образцов.
Содержание исследуемого вещества и/или метаболитов в выделениях, выдыхаемом воздухе,
крови и в тканях позволяет определить полное количество поглощенного вещества в определенное
время. Должно быть рассчитано количество исследуемого вещества, поглощенного 1 см2 кожи,
подвергаемой воздействию исследуемого вещества за период экспозиции.
4