ГОСТ 16445—2012
- пипетки вместимостью 1 см3 с ценой деления 0.01 см 3 по ГОСТ 29227 или дозаторы
пипеточные;
- баню водяную;
- маркеры по стеклу;
- физиологический раствор pH 6.8—7.2.
5.4.2 Подготовка к испытанию
5.4.2.1 Подготовка разведений гемолитической сыворотки
Готовят исходное разведение гемолитической сыворотки 1:100(0.1 см3 гемолитической
сыворотки и 9.9 см3физиологического раствора), из которого готовят разведения от 1:500 до 1:2000
(см. таблицу 2).
Т а б л и ц а 2
Объем исходного
разведения, см3
Общий объем, см3
Получаемое
разведение
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
Объем
физиологического
раствора, см3
0,8
1.3
1.8
2.3
2.8
3.3
3.8
1,0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
1:500
1:750
1:1000
1:1250
1:1500
1:1750
1:2000
Разведения сыворотки приготовлены с учетом массовой доли в ней глицерина (50 %). поэтому
при расчете количества сыворотки для постановки РСК следует исходить из ее титра, не учитывая
содержание глицерина, то есть при титре сыворотки 1:1000 ее удвоенный титр будет 1:500,
для приготовления которого следует взять 0.1 см3сыворотки и 49.9 см3физиологического раствора;
при титре 1:1500 удвоенный титр 1:750 (0.1 см3сыворотки и 74.9 см3физиологического раствора) и т.
д.
5.4.2.2 Подготовка 2.5 %-ной взвеси эритроцитов барана
Кровь у барана берут с утра до кормления из яремной вены во флакон со стеклянными
(керамическими) бусами и интенсивно перемешивают круговыми движениями флакона в процессе
взятия и в течение 7 мин после. Затем фильтруют через марлю и отмывают физиологическим
раствором путем центрифугирования при 2500 — 3000 об/мин по 15 - 10 мин до полного
обесцвечивания промывной жидкости, но не более четырех раз. Из осадка эритроцитов готовят 2.5
%-ную взвесь на физиологическом растворе.
5.5 Проведение испытания
5.5.1По 0.2 см3 кахедого разведения сыворотки переносят в серологические пробирки с
указанием разведений, начиная с наибольшего разведения (1:2000). Во все пробирки вносят по 0,2
см3комплемента в разведении 1:20. по 0,4 см3 физиологического раствора и по 0.2 см3 2.5 %-ной
взвеси эритроцитов барана.
Одновременно в этот же штатив ставят три пробирки для контроля.
В пробирки вносят:
в первую:
- 0.2 см3гемолитической сыворотки в разведении 1:100;
- 0.6 см3физиологического раствора;
- 0,2 см32.5 %-ной взвеси эритроцитов барана;
во вторую:
- 0.2 см5комплемента в разведении 1:20;
- 0.6 см3 физиологического раствора;
- 0.2 см3 2.5 %-ной взвеси эритроцитов барана;
в третью:
- 0.2 см32.5 %-ной взвеси эритроцитов барана;
- 0,8 см3физиологического раствора.
В первой контрольной пробирке определяют гемолитические свойства сыворотки, во второй -
гемолитические свойства комплемента, в третьей - резистентность эритроцитов барана (таблица 3).
5