ГОСТ 32367-2013
боратория должна сделать собственные номограммы связи между косвенным методом и содержани ем
углерода в культуре водорослей (см. приложение В с советами по созданию номограмм). Номо
граммы должны поверяться по крайней мере ежегодно или чаще, если меняются условия культиви
рования водорослей. Данные по абсорбции света являются более предпочтительным способом кос
венного определения углерода по сравнению с численностью клеток [17].
5.1.4.4Кормление Dapbnia осуществляют концентрированной суспензией водорослей для ми
нимизации объема культуры водорослей, вносимых в тестовую емкость. Концентрация водорослей
может быть достигнута центрифугированием с последующим разведением дистиллированной или
деионизированной водой или средой для содержания Daphnia.
5.1.5 Свет
Требования к освещению: 16 ч в сутки с интенсивностью не более 15-20 pE*m‘2»s"1.
5.1.6 Температура
Температура среды в аквариуме должна быть в пределах 18 X - 22 X . Однако во время теста
температура не должна изменятся более чем на 2 °С в указанных пределах, например: 18 °С - 20 X , 19
X - 21 X или 20 X - 22 X . Возможно использование дополнительной тестовой емкости для кон троля
температуры.
5.1.7 Аэрация
Тестовые емкости не следует аэрировать во время теста.
5.1.8 Тестовые концентрации
5.1.8.1 Полученная ранее информация о токсичности тестируемого вещества (например, ре
зультаты теста на острую токсичность и/или исследований по определению диапазона токсичности)
должна помочь в выборе соответствующих тестовых концентраций.
5.1.8.2 Обычно должно быть по крайней мере пять тестовых концентраций, возрастающих в
геометрической прогрессии с фактором разделения, равным 3.2. Соответственно следует соблюдать
число повторов (репликаций) для каждой тестируемой концентрации (см. 5.1.3.1, 5.1.3.2). Использо
вание менее пяти концентраций должно быть объяснено. Вещество не испытывают выше предела
растворимости в тестовой среде.
5.1.8.3 При установлении диапазона концентраций должно быть принято во внимание следую
щее:
- если цель исследования состоит в получении LOEC/NOEC, то плодовитость при самой низкой
тестовой концентрации не должна статистически отличаться от контроля. Если этого не произошло,
тест должен быть повторен с еще более низкой концентрацией;
- если цель состоит в том, чтобы получить LOEC/NOEC. самая высокая тестовая концентрация
должна быть достаточно высокой, чтобы плодовитость при этой концентрации была значительно ни
же, чем в контроле. Если этого не произошло, тест должен быть повторен с более высокой концен
трацией;
- если необходимо провести оценку ЕС, на эффекты воспроизводства для использования кон
центраций. достаточных для определения ЕС, с соответствующим уровнем достоверности. Если ЕС50
на эффекты воспроизводства оценены, желательно, чтобы самая высокая тестовая концентрация
была больше чем ЕСЮ. Иначе, хотя оценить ЕС50в этом случае будет возможно, доверительный ин
тервал для ECio будет очень широк и удовлетворительно оценить адекватность полученной модели
будет невозможно;
- диапазон испытываемых концентраций не должен включать концентрации, которые имеют
статистически значимый эффект на выживание взрослых особей, так как это меняет природу теста от
просто теста воспроизводства до объединенного теста на воспроизводство и смертность, требующе го
более сложного статистического анализа.
5.1.8.4 Если при приготовлении тестовых растворов используют растворитель или диспергатор
(см. 5.3.2 - 5.3.4). их финальная концентрация в тестовых сосудах не должна быть более 0.1 мл/л и
должна быть той же самой во всех тестовых сосудах.
5.1.9 Контроль
Необходимо поставить ряд контрольных тестов и при необходимости несколько рядов кон
трольных опытов, содержащих растворитель или диспергатор в дополнение к опытному ряду. При
использовании растворителя или диспергатора концентрация должна быть той же самой, что и в тес
товых емкостях. Соответствующим должно быть и число повторов (см. 5.1.3.1, 5.1.3.2.).
В корректно поставленном тесте коэффициент вариации вокруг среднего числа выжившего по
томства. произведенного родительскими особями в контроле(ях), должен быть равным или менее 25 %,
и эти данные нужно указывать для экспериментов с индивидуально содержащимися животными.
5.1.10 Обновление среды
5.1.10.1 Частота обновления среды зависит от стабильности тестируемого вещества, но его
5