ГОСТ 32367-2013
продуктивной способности в контроле, важен для разных видов Daphnia). Если используют другие
виды Daphnia, они должны быть идентифицированы и их применение должно быть обосновано.
4.1.4 Предпочтительно, чтобы у клона был идентифицирован генотип. Ряд исследований [5] по
казал. что способность к репродукции клона А (происхождением из IRCHA во Франции) [7] стабильно
отвечает критерию г 60 выживаемости потомства при условиях, описанных в настоящем стандарте.
Однако можно использовать и другие клоны при условии, что культура Daphnia отвечает критериям
теста.
4.1.5 В начале теста животные должны иметь возраст менее 24 ч и не должны относиться к пер
вому поколению. Они должны быть получены из здоровой популяции (то есть не имеющей таких при
знаков стресса, как высокая смертность, присутствие самцов и эфиппий, задержки производства пер
вого поколения, бесцветные животные, и.тщ.). Животных следует содержать в условиях культуры
(свет, температура, среда, кормление и количество животных на единицу объема) аналогичной той.
которую используют в тесте. Если среда культуры Daphnia. которую будут использовать в тесте, от
личается от среды культивирования Daphnia. необходимо провести акклиматизацию в течение при
близительно трех недель (то есть одного поколения), чтобы избежать стресса родительских живот
ных.
4.2 Среда для культивации
4.2.1 Рекомендуется использовать полностью синтетическую среду. Это позволит избежать по
падания посторонних добавок (например водорослей, экстрактов из почвы и тд.). которые трудно ха
рактеризовать. и. как следствие, улучшит возможности по стандартизации теста. Среды Элендт
(Elendt) М4 [8] и М7 (см. приложение А) считают наиболее подходящими для этих целей. Однако дру гие
среды также можно применять при условии, если культуры Daphnia отвечают критериям надежно сти
теста.
4.2.2 Если используют среду, включающую неидентифицированные добавки, то эти добавки
должны быть указаны и информация о них должна быть предоставлена в отчете об испытаниях. Осо
бенно это касается содержания углерода, поскольку он может влиять на режим питания. Рекоменду
ется определить величину ООУ и’или ХПК для оценки вклада ООУ/ХПК 8 питательную среду. Также
рекомендуется установить уровень ООУ в среде (то есть перед внесением водорослей) ниже 2 мг/л
[
11
]
4.2.3 В случае тестирования веществ, содержащих металлы, важно понимать, что свойства сре
ды (например, жесткость, хелатная способность) могут влиять на токсичность тестируемого вещест
ва. поэтому желательна среда с полностью определенным составом. Однако в настоящее время
единственными полностью определенными средами, которые подходят для длительного содержания
Daphnia тадпа. являются Elendt М4 и М7. Обе среды содержат комплексообразователь ЭДТА. Ис
следования (2) показали, что «очевидная токсичность» кадмия, как правило, ниже, когда тест выпол
няется в средах М4 и М7. чем в средах, не содержащих ЭДТА. Поэтому М4 и М7 и другие среды, со
держащие известные хелатные агенты, не рекомендуют для тестирования веществ, содержащих ме
таллы. Для металлсодержащих веществ желательно использовать альтернативную среду, такую,
как. например. ASTM, восстановленную жесткую пресную воду (11]. которая не содержит комплексо
образователь ЭДТА, с добавкой экстракта морских водорослей (12). Эта комбинация среды ASTM и
экстракта морских водорослей также подходит для длительного содержания культуры и тестирования
Daphnia тадпа [2], хотя все же проявляет умеренное хелатирующее действие из-за органического
компонента в добавленном экстракте морских водорослей.
4.2.4 Концентрация растворенного кислорода должна быть выше 3 мг/л в начале и в течение
всего теста. pH должен быть в диапазоне 6 - 9 и не должен меняться больше чем 1.5 единицы в те
чение теста. Жесткость рекомендуется выше 140 мг/л (по СаСОэ). Тесты на этом уровне и выше де
монстрируют репродукцию, соответствующую критериям пригодности (13]. (14].
4.3 Тестовый раствор
4.3.1 Тестовый раствор, как правило, доводят до необходимых концентраций путем разбавления
исходного раствора. Исходные растворы желательно получить путем растворения вещества а пита
тельной среде.
4.3.2 В некоторых случаях для получения необходимой концентрации основного раствора тес
тируемого вещества может потребоваться использование органических растворителей или дисперга
торов. однако необходимо предпринять все меры для того, чтобы избежать использования таких ве
ществ. Примеры подходящих растворителей: ацетон, этанол, метанол, диметилформамид и триэти-
ленгликоль. Примеры подходящих диспергаторов: Cremophor RH40. метилцеллюлоза 0,01 % и НСО-40.
В любом случае тестируемое вещество в тестовом растворе не должно превышать предел рас
творимости в тестовой среде.
3