ГОСТ 10444.12— 2013
По причине быстрого осаждения спор в пипетке (6.7) ее следует держать в горизонтальном (не
вертикальном) положении при заполнении соответствующим обьемом исходной суспензии или разве
дением.
Перед отбором исходной суспензии или разведения их встряхивают, для избежания осаждения
частиц содержащих микроорганизмы.
9.2 Инокуляция и инкубация
9.2.1 Вдве стерильные чашки Петри параллельно переносят с помощью стерильной пипетки (6.7)
1 см3 испытуемой пробы, если это жидкий продукт, или 1 см3исходной суспензии в случае продуктов
других консистенций.
В две другие чашки Петри переносят с помощью новой стерильной пипетки 1 см3 первого десяти
кратного (10 ) разведения (жидкий продукт) или 1см3 разведения 10’2 (продукты других консистенций).
Эти операции повторяют с последующими разведениями, используя новую стерильную пипетку
для каждого десятикратного разведения.
9.2.2 Посевы заливают плотной питательной средой по 4.1.2. Для инокуляции чашек Петри можно
также использовать поверхностный метод посева.
Поверхностный метод дает более высокие результаты подсчета и обеспечивает максимальное
воздействие атмосферного кислорода на клетки и предотвращает риск тепловой инактивации пророст
ков грибов, но результаты могут зависеть от вида грибов.
9.2.3 Засеянные чашки Петри (9.2.2) инкубируют аэробно, крышками вверх, в горизонтальном
положении в инкубаторе (6.3) при температуре (25 ± 1) °С 5 сут. При необходимости оставляют чашки
Петри при комнатной температуре от 1до 2 сут.
Рекомендуется инкубировать чашки (6.6) в пластмассовом пакете для избежания загрязнения ин
кубатора в случае разрастания плесневых грибов из чашек Петри.
9.3 Подсчет и отбор колоний для подтверждения
9.3.1После установленного периода инкубации отбирают чашки (9.2.3), количество КОЕ на кото
рых отвечает требованиям 4.1.5 и подсчитывают их. Если возникают трудности из-за быстрорастущих
плесневых грибов, то подсчитывают колонин/проростки /зародыши через 3 сут. и затем через 5 до 7
дней инкубации.
П р и м е ч а н и я
1 Методы подсчета дрожжей и особенно плесневых грибов не являются точными, потому что они состоят
из смеси мицелия и спор бесполого и полового размножения. Количество колониеобразующих единиц зависит от
степени фрагментации мицелия и соотношения спор, способных расти на питательной среде.
2 Часто имеет место отсутствие зависимости подсчетов при инокуляции с использованием разведений, т.е.
10-кратные разведения часто не дают 10-кратного уменьшения количества колоний, полученных на питательной
среде. Это относят за счет фрагментации мицелия и разрыва скоплений спор во время разведения.
3 Споры плесневых грибов рассеиваются в воздухе с большой легкостью, поэтому при работе с чашками
Петри следует соблюдать осторожность для избежания развития вторичных колоний, которые дают завышенную
оценку количества плесневых грибов в образце.
При необходимости, для отличия клеток дрожжей или плесневых грибов от бактерий проводят
исследование с помощью микроскопа (6.10). Подсчитывают, если необходимо, отдельно колонии дрож
жей и колонии/проростки^ародыши плесневых грибов.
Для идентификации дрожжей и плесневых грибов определяют области роста и отбирают из них
часть колонии для микроскопирования или для пересева на соответствующую среду для изоляции или
идентификации.
9.3.2.Если количество выросших дрожжей или плесневых грибов удовлетворяет 4.1.5 в двух по
следовательных разведениях, то количество их на 1 г или 1 сантиметр кубический продукта (X) вычис
ляют по формуле
1 C
л,+ л2+ 0,1
х10"
(
1
)
где £С-сумма всех подсчитанных колоний на чашках Петри в двух последовательных разведениях;
5