ГОСТ Р 55448—2013
интенсивно перемешивают 30 мин. Пропускают полученный экстракт через бумажный складчатый
фильтр «красная лента», отбирая 20 см3фильтрата для упаривания.
Если не удается отобрать 20 см3фильтрата, то отбирают максимально возможный объем,
измеряют его и используют полученное значение в формуле (6).
Переносят полученный фильтрат в остродонную колбу вместимостью 50 см3 и упаривают
досуха в вакууме при температуре водяной бани 40 еС - 45 °С.
8.2 Очистка фильтрата
Сухой остаток, полученный по 8.1. растворяют в 1 см3хлороформа, получая таким образом
концентрат анализируемой пробы.
Подготавливают стеклянную колонку по 7.8. Дают хлороформу стечь до уровня сульфата
натрияинаносятнаколонкуконцентратанализируемой
пробы. Остродонную колбу из-под фильтрата ополаскивают 2 раза по 1 см3 хлороформа, который
также наносят на колонку. После этого промывают колонку 10 см3гексана, элюат отбрасывают.
Далее через колонку пропускают 30 см3смеси хлороформа с муравьиной кислотой (см. 7.4.4),
элюируя охратоксин А со скоростью прокапывания не более чем одна капля в секунду. Весь элюат
собирают в остродонную колбу и упаривают досуха ввакууме при температуре водяной бани 40 °С- 45 °С.
Сухой остаток растворяют в 0.5 см3 подвижной фазы (см. 7.4.2) и перемешивают 1 мин. Затем
добавляют 3 см3 гексана и снова интенсивно перемешивают. После расслоения двух
несмешивающихся между собой фаз аккуратно, при помощи градуированной пипетки вместимостью 1
см3 или одноканального пипеточного дозатора, переносят приблизительно 0.3 см3 нижнего слоя в
пробирку для микропроб однократного применения вместимостью 1,5 см3 (пробирка Эппендорфа).
Полученный концентрат используют для хроматографических измерений по 8.3 в день проведения
испытаний.
8.3 Проведение хроматографических измерений
Регистрируют не менеедвух хроматограмм концентрата анализируемой пробы, полученного по
8.2. в тех же условиях, при которых была проведена градуировка системы. Идентификацию
охратоксина А проводят по совпадению времени удерживания охратоксмна А в экстракте пробы с его
временем удерживания, полученном при контроле стабильности градуировочной характеристики,
установив ширину окна идентификации 5 %.
Пример хроматограммы приведен на рисунке А.1 (приложение А).
При наличии на хроматограмме концентрата пробы пика, идентифицированного как пик
охратоксина А. делают вывод о присутствии охратоксина А в анализируемой пробе, определяют его
содержание по каждой зарегистрированной хроматограмме и проверяют расхождение полученных
значений между собой, используяформулу (2).
Если условие формулы (2) выполняется, то в качестве результата измерений массовой
концентрации охратоксина А в концентрате анализируемой пробы принимают среднеарифметическое
значение полученных массовых концентраций. Если условие формулы (2) не выполняется, то находят
и устраняют причины нестабильности, после чего ввод концентрата анализируемой пробы повторяют.
При необходимости подтверждения правильности идентификации пика охратоксина А
рекомендуется добавить стандартный градуировочный раствор охратоксина А к концентрату
анализируемой пробы. О достоверности идентификации можно судить по увеличению высоты
предполагаемого пика охратоксина А. Количество добавляемого раствора охратоксина А определяют,
исходя из того, что массовая доля охратоксина А в пробе должна увеличиться на 50 % - 150 % по
сравнению с исходным значением.
Если массовая концентрация охратоксина А в конечном концентрате. Сх. превышает 100 нг/см3,
то его необходимо разбавить подвижной фазой (см. 7.4.2). Коэффициент разбавления. О. вычисляют
по формуле
О
(
6
)
гдеVp - объем разбавленного концентрата анализируемой пробы, см3;
Va - объем аликвотной порции концентрата анализируемой пробы, взятый для разбавления, см3.
8