ГОСТ 32249—2013
Т а б л и ц а 2 — Порядок проведения анализа
Наименование растворов, дотируемых в кювету,
и последовательность их дозирования
Кюветы
Раствор сравнения
Анализируемая проба
Реактив 1 по 7.1.1 или раствор по 7.2.1
1,00 см3
1,00 СМ3
Реактив 2 по 7.1.2 или раствор по 7.2.2
0.10
cmj
0,10 СМ5
Проба
—
0.10 см»
Вода дистиллированная
2.00 см*
1.90 см5
Шпателем перемешивают помещенные в кюветы растворы, через 2 мин проводят измерения оптических
плотностей растворов (А;.) относительно оптической плотности воздуха
Реактив 3 по 7.1.3 или раствор по 7.2.30.05 смз0,05 смз
Осторожно перемешивают помещенные в кюветы растворы, после завершения реакции (6—8 мин) проводят
измерения оптических плотностей растворов
(А2)
относительно оптической плотности воздуха.
Если ферментативная реакция не закончилась через 30 мин и значения оптической плотности растворов уве
личиваются с течением времени, то значения (Л2) определяют методом экстраполяции на момент внесения реак
тива 3 по 7.1.3.
Для контроля точности результатов определений параллельно проводят измерение контрольного раствора
по 7.2.5.
Пробы анализируют два раза в условиях повторяемости
9 Обработка результатов спектрофотометрических измерений
Измеряемой величиной является разность в оптической плотности растворов до и после обработ
ки ферментом при длинах волн 334. 340 или 365 нм, которая пропорциональна массовой концентрации
(массовой доле) этилового спирта в анализируемой пробе.
Разность значений оптических плотностей ДДс0Иртвычисляют по формуле
^^олирт “"* ^iXipoOa —^ 2 “ ^Аомтроль*
где (А2- А,)гро6а — разность оптических плотностей раствора анализируемой пробы;
(А2- А()>омтропь — разность оптических плотностей раствора сравнения.
Разность оптическихплотностей ДД.пиргдолжна находиться в интервале от 0,1 до 0,5 единиц опти
ческой плотности (измерения при длине волны 365 нм) или от 0,1 до 0,8 единиц оптической плотности
(измерения при длинах волн 334 и 340 нм). При превышении указанных значений разности оптических
плотностей раствор анализируемой пробы дополнительно разбавляют дистиллированной водой. При
меньшей разности оптических плотностей (менее 0.1) объем анализируемой пробы, дозируемый в кю
вету. увеличивают, а количестводистиллированной воды, соответственно, уменьшают так. чтобы объем
анализируемой пробы в кювете оставался постоянным в соответствии с таблицей 2.
Массовую концентрациюиртэтилового спирта в пробе, мг/дм3, вычисляют по формуле
w—- г .(2>
где V— окончательный объем растворов в кювете по таблице 2, см3;
М — молярная масса этанола, М - 46.07 г/моль;
F — фактор разбавления в соответствии с таблицей 1;
дАт — разность оптических плотностей;
г.— молярный коэффициент поглощения НАДН. дм3 ммоль-1 см-1:
- при длине волны 340 нм
с
= 6.3,
- при длине волны 365 нм»: = 3,4 (ртутная лампа),
- при длине волны 334 нмс = 6,18 (ртутная лампа);
d — толщина поглощающего слоя в кювете, см;
v — объем анализируемой пробы (см. таблицу 2), см3.
6