ГОСТ 32201—2013
7
Отбор проб
Отборпроб
—
поГОСТ 13496.0.
8
Подготовка проб
Пробу тщательно перемешиваюти измельчаютдо прохода через сито (см.
4.15). Перед измельче
нием
пробы с высокой влажностью должны быть высушены при температуре не выше 50 5С или лиофи-
лизированы, а пробы с высоким содержанием жира — обезжирены петролейным эфиром
{см.
5.9).
9
Проведение испытания
9.1
Определение свободного триптофана (экстракция)
На весах
(см.
4.11)
взвешивают от (
1.000
i
0.001)
г до (
5.000
1
0.001)
г
пробы
, подготовленной в
соответствиис разделом 8.
иколичественно переносят вконическую колбу (см.
4.13).
Добавляют 100 см3соляной кислоты (см.
6.4)
и5.00 см3концентрированного внутреннего стандар
та (см.
6.8).
Встряхивают или перемешивают втечение 60 мин с помощью механического шейкера или
магнитной мешалки (см.
4.7). Раствору
дают отстояться, затем переносят пипеткой (см.
4.12)
10.0
см3
надосадочной жидкости встакан (см.
4.14).
Добавляют 5 см3ортофосфорной кислоты (см.
5.6)
идоводят
значение pH до 3.0 ед. pH раствором гидроксида натрия (см.
6.1).
Добавляют достаточное количество
метанола
{см. 5.8).
чтобы получить концентрациюот 10 % до 30 % метанола вконечном объеме. Перено
сят вмерную колбусоответствующей вместимости иразбавляютводой (см. 5.
1
)дообъема, необходимо го
для хроматографии [приблизительно тот же объем, как в градуировочном растворе стандарта (см.
6.8)].
Перед введением вколонку высокоэффективного жидкостного хроматографа несколько кубичес
ких
сантиметров
раствора следует профильтровать через мембранный фильтр (см.
4.5).
Хроматогра
фию проводят всоответствии с 9.3.
Стандартныерастворы иэкстракты необходимозащищатьот прямых солнечных лучей. Если полу
ченный экстракт невозможно проанализировать ВЭЖХ втотжедень, его хранят не более трехдней при
температуре ниже 5 °С.
9.2
Определение общего триптофана
{гидролиз)
В полипропиленовую колбу вместимостью 125 см3 (см.
4.4)
помещают от
{0.10001 0.0002)
г до
(7.0000И5.0002) г подготовленной
пробы.
Взятая
анализируемая
проба должна содержать около
0,0100 газота.
В колбу
добавляют 8.4 г гидроокиси бария (см.
5.4)
и 10 см3 воды (см.
5.1).
Перемешивают с
помощью миксера (см.
4.8)
или магнитной мешалки (см.
4.7),
магнит которой должен быть покрыт тефло
ном. Обмывают стенки сосуда 4
см3
воды (см. 5.7). плотно закрывают
крышкой
и помещают вавтоклав
или сушильный шкаф (см.
4.6),
прогретый в течение 30—60 мин. Закрывают автоклав или сушильный
шкаф и выдерживают пробу при температуре (110 12) °С втечение 20 ч.
Перед
открытием автоклаватемпературу необходимоснизитьдо 100 гС.Для того чтобы избежать
кристаллизации гидроокиси бария,добавляют втеплую смесь 30 см3воды (см. 5.7) комнатной темпера
туры. встряхивают или осторожно перемешивают.
В полученныйраствор
добавляют 2.00 см3концен
трированного внутреннего стандартного раствора (а-метилтриптофан) (см.
6.7).
Охлаждают сосуд в
воде
или
на ледяной бане втечение 15 мин.
S
охлажденныйгидролизат
добавляют 5
см3
ортофосфорной кислоты (см. 5.6). На охлаждающей
бане нейтрализуют раствор с помощью растворасоляной кислоты
молярной концентрации
6 моль/дм3
(см. 6.2) при перемешивании идоводят
значение
pH до 3.0 ед.
pH с
помощью раствора соляной кислоты
молярнойконцентрации
1моль/дм3(см. 6.3).Добавляютметанолдо получения концентрацииот 10% до
30 % метанола вконечном объеме. Переносят в мерную колбу соответствующей вместимости иразбав
ляют водой(см. 5.7)дообъема. необходимогодля хроматографии (например. 100
с/л3).При
добавлении
метанола не должен
образовываться
осадок.
Передвведением в колонку высокоэффективного жидкостного хроматографанесколько куби
ческих сантиметровраствора следует профильтровать через мембранный фильтр (см. 4.5).
Стандартныерастворы иэкстракты необходимозащищатьот прямых солнечных лучей. Если полу
ченный экстракт невозможнопроанализировать ВЭЖХ втот жедень, его следует хранить неболее трех
дней при температуре ниже 5 °С.
4