ГОСТ 32201—2013
Приложение А
(справочное)
Уточнения по выполнению измороний
А.1 Лучшее разделение между триптофаном и а-метилтриптофаном могут дать специальные условия хро
матографии.
Условия изократического элюирования с последующим градиентом промывки колонки приведены в табли
це А.1.
Т а б л и ц в А.1
Наименование параметра
Значение и характеристика параметра
Жидкостная хроматографическая колонка
Температура колонки
Подвижная фаза
125 «4 мм. с наполнителем С-в. с размером частиц 5мкм
или эквивалентным
32 °С__________________________________________________
Скорость потока
Общее время работы
А: раствор калия фосфорнокислого однозамещенного
молярной концентрации 0.01 моль/бм^/метанол в объемном
соотношении 95:5:
б: метанол
Программа градиента0 мин100 % А0 % б
15 мин100% А0% б
17 мин60% А40 % б
19 мин60% А40 % б
21 мин100 % А0% б
33 мин100% А0% б
1.2 си*/мин
Около 33 мин
А.2 Хроматография будет варьироваться взависимости от типа используемого наполнителя ВЭЖХ колонки,
выбранная система должна давать достаточное разделение между триптофаном и внутренним стандартом. Кроме
того, важно, чтобы продукты гидролиза хорошо отделялись от триптофана и внутреннего стандарта. Для подтвер
ждения правильности выбора основного пика должен быть проанализирован гидролизат без внутреннего стандар
та. Важно, чтобы время выполнения анализа было достаточно длительным для элюирования всех продуктов
разложения, иначе поздно элюированные пики могут помешать при последующих запусках хроматографии.
Хроматография должна давать линейную зависимость во всем диапазоне измерений. Линейность следует
проверять с постоянной (нормальной) массовой концентрацией внутреннего стандарта и различными массовыми
концентрациями триптофана. Важно, чтобы размер пиков триптофана и внутреннего стандарта были в пределах
линейного диапазона ВЭЖХ/флуоресценции системы. Если один из пиков триптофана и^или внутреннегостандар-
та(ов). слишком мал или слишком велик, анализ следует повторить с другой массовой концентрацией и/или с изме
ненным конечным объемом.
А.З Со временем гидроксид бария растворяется хуже. В результате неочищенный раствор для определения
ВЭЖХ может привести к ухудшению результатов определения триптофана.
7