ГОСТ 32201—2013
3
Сущность метода
Для определения общего триптофана анализируемую пробу подвергают щелочному гидролизу в
насыщенном растворе гидроксида бария и нагревают до температуры 110 X втечение 20 ч. После гид
ролиза добавляют внутренний стандарт.
Для определения свободного триптофана экстракцию проводят в мягких кислых условиях в при
сутствии внутреннего стандарта.
Триптофан и внутренний стандарт в гидролизате или в экстракте определяют с помощью обрат
но-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуоресцентной
детекцией.
4
Лабораторное оборудование и посуда
4.1
Хроматограф жидкостный
со спектрофлуоресцентным детектором.
4.2 Колонка хроматографическая
размерами
125 х 4 мм, с наполнителем С18с
размером частиц
3 мкм или эквивалентным.
4.3 рН-метр.
4.4 Колба полипропиленовая вместимостью 125
см3
с широким горлышком и завинчивающейся
крышкой.
4.5 Фильтр мембранный с
размером пор
0,45 мкм.
4.6 Автоклав, способный поддерживать температуру (110± 2)вС и давление [(140
з.
10) кПа
(1,4 ♦.0,1) бар].
При использовании герметично закрывающихся емкостей (см. 4.9) допускается применение
сушильного шкафа, поддерживающего температуру (110
а
2) °С.
4.7 Шейкер механический или мешалка магнитная.
4.8 Вортекс-миксер.
4.9 Емкости герметично закрывающиеся, которые могут использоваться при температуре
(110 ±2) °С.
4.10 Колбы мерные 1(2)-50(100. 500. 1000) — 2 по ГОСТ 1770.
4.11 Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допуска
емойпогрешностью
л.
0.0001 г.
4.12 Пипеткиградуированные 1(2,3. 5)-1(1а. 2. 2а)-1-1(2. 5. 10)лоГОСТ 29227.
4.13 Колбы конические Кн-2-250-ТХСпоГОСТ25336.
4.14 Стаканы В(Н)-1(2)-50(1000) ТХС по ГОСТ25336.
4.15 Сито сразмером стороны квадратнойячейки 0.5 мм.
П р и м е ч а н и е — Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с
аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов, по качеству не
ниже указанных
5 Реактивы
5.1 Вода, дважды дистиллированная или вода эквивалентной чистоты (электропроводность
менее 10 мкс/см).
5.2 Стандартный образец триптофана (с массовой долей основного вещества не менее 99 %).
высушенный в вакууме над пятиокисью фосфора.
5.3 Внутренний стандарт: а-метилтриптофан (с массовой долей основного вещества не менее
99 %), высушенный ввакууме над пятиокисью фосфора.
5.4
Гидроокись
бария
8-водная поГОСТ4107. х. ч.
П р и м е ч а н и е — Следует избегать контакта Ва(ОН)г• 8НгО с воздухом, чтобы исключить образование
ВаСОз. который может мешать определению (см. приложение А.З).
5.5 Натрия
гидроокись по ГОСТ4328.
5.6 Кислота ортофосфорная с
массовойдолей
85 %.
5.7 Кислота соляная
поГОСТ3118.
концентрированная.р20= 1.19г/см3.
5.8 Метанол
по ГОСТ6995. степень чистоты
для ВЭЖХ.
5.9 Эфир петролейный, с
температурой
кипения от40 °С до 60 °С.
5.
10 Кислота уксуснаяпо ГОСТ61.
5.11
Этаноламин с массовой долей основного вещества более 98 %.
2