ГОСТ 16446-2012
(флаконы) слегка встряхивают, комплемент сливают в одну емкость, перемешивают и непосредст
венно перед титрованием готовят разведение 1 :20.
Комплемент в разведении 1 : 20 микропипеткой вместимостью 0.2 см3или дозатором вносят в
ряд пробирок в дозах от 0.02 до 0,2 см3с шагом0,02 см3 (0.02; 0.04; 0.06 см3и т. д.). Затем в
пробирки вносят физиологический раствор до 0,2 см3 общего обьема жидкости (0,018; 0.016; 0,014
см3ит. д.). После этого в каждую пробирку вносят по 0,4 см3физиологического раствора и по
0.4 см3гемолитической системы.
Одновременно в штатив устанавливают три пробирки для контроля. В первую пробирку вно
сят: 0.2 см’’ комплемента в разведении 1 : 20. 0.2 см32,5 %-ной взвеси эритроцитов барана и 0.6
см3физиологического раствора; во вторую пробирку — 0.2 см32.5 %-ной взвеси эритроцитов барана,
0.2 см3гемолитической сыворотки в удвоенном титре и 0.6 см3физиологического раствора; в третью
пробирку — 0.2 см32.5 %-ной взвеси эритроцитов барана и 0.8 см3физиологического раствора. Пер
вая пробирка служит для контроля гемолитических свойств комплемента, вторая — для контроля
гемолитической сыворотки, а третья — для установления резистентности эритроцитов барана.
Штатив с пробирками встряхивают и помещают в водяную баню при температуре 37 °С - 38
°С на 10 мин. Схема титрования комплемента в гемолитической системе представлена в таблице 2.
Т а б л и ц а 2 - Схема титрования комплемента в гемолитической системе
Компоненты
1
2
Номера пробирок. Дозы компонентов (сма)
345678910
Комплементв 0.020.040.060.080,10.120,140.160.180.20
разведении 1 :20
Физиологический0.580.560.540,520.500.480.460.440.420.4
раствор
Гемолитическая0.40.40.40,40.40.40.40.40.40.4
система
Водяная баня 37 иС - 38 “С - 10 мин
Примерныйре ЧГЧГЧГЧГПГПГПГПГПГПГ
зультат
П р и м е ч а н и я
1ЧГ - частичный гемолиз; ПГ - полный гемолиз.
2 Штатив с пробирками извлекают из бани и немедленно проводят учет реакций в прохо-
дящем свете.
6.6.4 Обработка результатов
Количество доз комплемента К во флаконе (ампуле) в зависимости от установленного титра
рассчитывают по формуле
14
-
титр
>v-v
где а - количество физиологического раствора, необходимое для растворения содержимого
одного флакона (ампулы), см3;
20 - кратность разведения исходного раствора комплемента при титровании.
Пример — При а = 2 см3и ти тр е 0,10
к
оличество доз
к
омплемента во фла
к
оне (ампу
ле) равно:
?
10
К =
4
20
400 яя.
Комплемент считают активным при титре не ниже 0.14 при отсутствии гемолиза эритроцитов в
контрольных пробирках.
7 Транспортирование и хранение
7.1 Комплемент транспортируют всеми видами крытого транспорта.
7.2 Допускается транспортирование комплемента при температуре не выше 20 °С. при этом
срок транспортирования не должен превышать 5 сут.
7.3 Комплемент хранят в чистом сухом темном помещении в упаковке производителя при
температуре от 2 °С до 8 "С в пределах срока годности.
7