ГОСТ 16446-2012
6.4 Определение массовой доли влаги
Массовую долю влаги определяют по ГОСТ 24061.
Массовая доля влаги в препарате должна быть не более 3 %.
6.5 Определение вакуума в ампулах
Наличие вакуума в ампулах определяют по ГОСТ 28083.
В ампулах с препаратом должен быть вакуум.
6.6 Определение гемолитических свойств и активности (титра) комплемента
Активность комплемента определяют по полному (100 %-ному) гемолизу эритроцитов в гемо
литической системе.
Титром комплемента считают наименьшее его количество (наибольшее разведение), при ко
тором в течение 10 мин при температуре 37 еС - 38 SC наступает полный гемолиз 0.2 см32.5 %-ной
взвеси эритроцитов барана в присутствии 0.2 см3гемолитической сыворотки и 0.6 см3физиологиче
ского раствора.
Гемолитические свойства комплемента характеризуется полным отсутствием гемолиза эрит
роцитов барана в пробирке без гемолитической сыворотки.
6.6.1 Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
- центрифугу:
- баню водяную;
- штативы для пробирок;
- пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
- флаконы вместимостью 250 см3;
- колбы стеклянные вместимостью 50. 100 см3 по ГОСТ 1770;
- бусы стеклянные или металлические:
- воронки стеклянные по ГОСТ 25336;
- иглы для взятия крови;
- пипетки мерные вместимостью 1,2. 5 и 10 см3по ГОСТ 29230;
- микропипетки вместимостью 0.2 см3;
- дозаторы
- физиологический раствор хлористого натрия pH 6.8—7,2;
- марлю медицинскую по ГОСТ 9412;
- сыворотку гемолитическую по ГОСТ 16445.
6.6.2 Подготовка к испытанию
6.6.2.1 Приготовление 2.5 %-ной взвеси эритроцитов барана
Кровь у барана берут с утра до кормления из яремной вены во флакон со стеклянными (кера
мическими) бусами и интенсивно перемешивают круговыми движениями флакона в процессе взятия и в
течение 7 мин после. Затем фильтруют через марлю, отмывают физиологическим раствором путем
центрифугирования при 2500 об/мин по 10 мин до полного обесцвечивания промывной жидкости, но не
более четырех раз. Из осадка эритроцитов готовят 2.5 %-ную взвесь на физиологическом раство ре.
Для приготовления гемолитической системы смешивают в равных объемах 2.5 %-ную взвесь
эритроцитов барана в физиологическом растворе и рабочее разведение гемолитической сыворотки в
удвоенном титре (например, при титре 1 ; 1000 берут 2 ; 1000. то есть для приготовления 50 см/ ра
бочего разведения гемолитической сыворотки 0.1 см3препарата из ампулы разводят в 49.9 см3фи
зиологического раствора). Затем отбирают в отдельные пробирки по 1 см32,5 %-ной взвеси эритро
цитов барана и рабочего разведения гемолитической сыворотки для контроля. Оставшиеся 49 см3
рабочего разведения гемолитической сыворотки добавляют при постоянном помешивании к 49 см3
взвеси эритроцитов. Эритроциты барана сенсибилизируют антителами гемолитической сыворотки
путем выдерживания гемолитической системы в водяной бане при температуре (37
±
1)0С в течение
20 мин при трехкратном периодическом перемешивании, и после остывания до комнатной темпера
туры используют для титрования активности комплемента.
6.6.3 Проведение испытания
В три флакона (ампулы) с комплементом вносят физиологический раствор в объеме, указан
ном на флаконе (ампуле), и помещают в холодильник. После растворения содержимого ампулы
6