ГОСТР ИСО 9233-2—2011
шалке (5.6) или встряхивают в точение 90 мин в аппарате для встряхивания (5.6). С помощью измери
тельного цилиндра добавляют 25 см3 воды. Сразу же переносят коническую колбу в морозильную
камеру (5.12) приблизительно на 60 мин.
8.2.2.2 Фильтрование
Фильтруют раствор, как описано в 8.2.1.2.
8.3Определение
8.3.1 Определение и пределы обнаружения
Л
аборатория, которая применяет данный метод, должна установить пределы обнаружения и про
вести определение в собственных инструментальных условиях, используя признанные методы расче
та. для верификации того, что натамицин может бытьопределен при концентрацияхвплотьдо 0.5 мг/кг и
0.03 мг/дм2.
8.3.2 Настройка жидкостного хроматографа (5.14)
Рекомендуется следующий хроматографический режим:
подвижная фаза: метанол (4.1) — вода — уксусная кислота (4.4) — 12:8:1 (объемных частей):
поток: 1 см3/мин;
установка детектора: 303 нм. 0.005 оптической единицы, вся шкала;
регистрирующее устройство: 10 мВ;
число теоретических (типичных) тарелок: минимум 1500.
При использовании другой колонки, отличной от приведенной в качестве примера (5.15). регу
лируют соотношение метанол:вода. Однако заданное относительное количество уксусной кислоты
(4.4) к метанолу является существенным для сохранения максимальной оптической плотности при
303 нм. Для определения времени удерживания и проверки калибровочного графика (8.3.3) перед
испытанием каждой серии проб в хроматограф должен вводиться стандарт с известным содержани ем
иатамицина. Поскольку натамицин не устойчив в водном метаноле, выполняют измерение как можно
быстрее.
8.3.3 Построение калибровочного графика
Отбирают пипеткой 1,2.4. 6 и 8 см3стандартного рабочего раствора натамицина (4.3.2) соответ
ственно в серию мерных колб с одной меткой вместимостью 50 см3(5.1). Доводят до метки водным ме
танолом (4.2) и перемешивают. Полученные таким образом калибровочные растворы содержат 0.1; 0,2;
0.4; 0.6 и 0.8 мкг/см3 натамицина соответственно. Поочередно вводят в колонкупо20 мкл каждого калиб
ровочного раствора. Определяют площадь или высоту полученных пиков. Наносят на график получен
ные площадь или высоту пика для каждого раствора по оси ординат относительно концентрации
натамицина, в микрограммах на миллилитр, пооси абсцисс. HPL-хроматограмма образца приведена на
рисунке А.З.
8.3.4 Испытуемый раствор
Вводят 20 мкл испытуемого раствора (8.2.1.2 или 8.2.2.2). Измеряют площадь или высоту пика с
таким же временем удерживания, что и калибровочные растворы натамицина. Выполняют измерение по
возможности быстрее. Если площадь или высота пика испытуемого раствора настолько мала, что ин
терполяция по калибровочному графику невозможна или почти невозможна, а определение тем не ме
нее необходимо, следуют методике, указанной в 8.3.5. Примеры НPL-хроматограмм испытуемых
растворов приведены на рисунке А.4.
П р и м е ч а н и е — Присутствие в сыре специй, особенно перца, может мешать определению, поскольку на
хроматограмме может образовываться пик с тем же временем удерживания, что и у пика, соответствующего ната-
мицину. Разделение этих двух пиков может быть достигнуто путем градиентного элюирования или изократического
использования альтернативной подвижной фазы метанол (4.1): фосфатный буфер. pH 4.5 с соотношением 11:9
объемных частей. Раствор фосфата для буферного раствора можно приготовить при растворении 3.026 г дигидро
ортофосфата калия в 1 дм3 воды.
8.3.5 Низкое содержание натамицина
8.3.5.1 Концентрирование
Решают вопрос онеобходимости использования приблизительно 5- или 10-кратной концентрации.
Основываютэто решение на результате, полученном в 8.3.4. ина требуемом пределе определения. За
тем в химический стакан отбирают пипеткой 25 см3 или 50 см3 (для 5- или 10-кратной концентрации соот
ветственно) испытуемого раствора (8.2.1.2). В зависимости от требуемой концентрации добавляют 50
или 100 см3воды соответственно и перемешивают. Активируют экстракционную гильзу (5.13), исполь
зуя от 3до 5 см3метанола (4.1). Затем промывают 10 см3воды. Пропускают разбавленный испытуемый
4