ГОСТ 31781—2012
Т аб лица 3 — Программа окрашивания полиакриламидных гелей с помощью раствора кумасси бриллиантового
голубого
Номер этапа
Наименование раствора
время, мин
Температура. "С
1
Фиксирующий
5
20
2
Промывной
2
20
3
Окрашивающий
10
50
4
Промывной
5
50
5
Конев рвирующий
10
50
Т аб л и ца 4 — Программа окрашивания полиакриламидных гелей с помощью раствора азотнокислого серебра
Номерэтапа
Наименование
Время, мин
Температура. *С
1
Фиксирующий
5.0
20
2
Промывной
2.0
50
3
Промывной
4.0
50
4
Усиливающий окраску
6.0
50
5
Промывной
3.0
50
6
Промывной
5.0
50
7
Дистиллированная вода
2.0
50
8
Дистиллированная вода
2.0
50
9
Окрашивающий
10.0
40
10
Дистиллированная вода
0.5
30
11
Дистиллированная вода
0.5
30
12
Развивающий окраску
0.5
30
13
Развивающий окраску
0.5
30
14
Останавливающий окраску
2.0
30
15
Консервирующий
5.0
50
Растворы используют только один раз (за исключением фиксирующего раствора), не применяя
циркуляцию. Приготовленные растворы, за исключением проявителя, стабильны 2—3 сут при темпера
туре от 20 °С до 25 вС.
Окрашивание и обесцвечивание занимают от 30 до 35 мин. После консервирования полиакри
ламидные гели вынимают из системы и высушивают при температуре от 20 °С до 25 ’С в течение 4 ч.
9 Обработка результатов анализа
9.1 Полученную картину распределения белковых полос анализируемой пробы сравнивают с
картиной распределения белковых полос референс-образца.
9.2 Строят графическую зависимость значений изоэлектрических точек стандартных белков от
расстояния каждой белковой полосы до катода (см. приложение А.2).
9.3 Измеряют расстояние от катода до локализации белковых полос исследуемого образца и
референс-образца и с помощью калибровочного графика, построенного по 9.2. находят соответствую
щие значения изоэлектрических точек белков.
Графическое построение и определение изоэлектрических точек может осуществляться с помо
щью компьютерной программы после переноса изображения распределения белковых полос с полиа
криламидного геля на монитор компьютера с использованием систем видеодокументирования.
6