ГОСТ 31781—2012
перемешивают в течение 10 мин. Затем добавляют 120 см396 %-мого этилового спирта и перемешива
ют в течение 5 мин.
7.1.3.2 Рабочий раствор: смешивают 10 см3 раствора по 7.1.3.1 с 90 см3 раствора по 7.1.2. до
бавляют (0.170
±
0.001) г сернокислой 5-водной меди. Сульфат меди добавляют, чтобы уменьшить
окрашивание фона. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
7.1.4 Консервирующий раствор: в колбу вместимостью 1000 см3вносят 40 см3глицерина, добав
ляют 920 см3 дистиллированной воды и 40 см3уксусной ледяной кислоты.
7.1.5 Промывной раствор готовят в количестве не менее 400 см3, фиксирующий, окрашивающий
и консервирующий растворы — не менее 80 см3.
7.2Растворы для обработки гелей при окрашивании серебром
7.2.1 Фиксирующий раствор: в колбу вместимостью 500 см3 помещают (100,00
±
0,01) г трихло-
руксусной кислоты и доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор используют 3—4 раза.
7.2.2 Промывной раствор: в колбу вместимостью 1000 см3 вносят 100 см3 96 %-ного этилового
спирта, добавляют 850 см3дистиллированной воды и 50 см3ледяной уксусной кислоты.
7.2.3 Раствор, усиливающий окраску (сенсибилизатор): в колбе вместимостью 100 см3смешивают
30 см325 %-ного глутарового альдегида и 60 см3 дистиллированной воды.
7.2.4 Окрашивающий раствор: в колбу вместимостью 100 см3вносят (0.150
±
0.001) г азотнокис
лого серебра идоводят объем дистиллированной водой до метки.
7.2.5 Раствор, развивающий окраску (проявитель): в колбу вместимостью 1000 см3 вносят
200 см312,5 %-ного раствора углекислого натрия. 800 см3дистиллированной воды и 400 мкл 37 %-ного
формальдегида.
7.2.6 Раствор, останавливающий окраску: в колбу вместимостью 100 см3вносят (1.60
±
0.01) г тио
сульфата натрия и (3.70
±
0,01) г mpuc-HCI и доводят объем дистиллированной водой до метки.
7.2.7 Консервирующий раствор: в колбу вместимостью 100 см3 вносят 10 см3 глицерина идоводят
объем дистиллированной водой до метки.
7.2.8 Промывной раствор готовят в количестве не менее 400 см3. Фиксирующий, окрашиваю
щий. проявляющий растворы и растворы, усиливающий окраску и останавливающий окраску, готовят в
количестве не менее 80 см3. Количество дистиллированной воды — не менее 400 см3.
8 Проведение анализа
8.1 Приготовление проб для анализа
8.1.1 Мышечную ткань исследуемого образца и референс-образца освобождают от крови, темных
мышц. Навеску массой (5,0
±
0.1) г светлой мышечной ткани рыбы-сырца, филе или сырого фарша
измельчают в течение 30 с в ступке с 5 см3 дистиллированной воды.
8.1.2 Смесь, полученную по 8.1.1. переносят в центрифужные пробирки вместимостью 50 см3
и центрифугируют при температуре 4 °С в рефрижераторной центрифуге при частоте вращения
4000 мин-1 в течение 15 мин.
8.1.3 Надосадочную жидкость, полученную по 8.1.2. переносят в центрифужные пробирки
вместимостью 10 см3 и центрифугируют при температуре 4 °С в рефрижераторной центрифуге при
частоте вращения 12000 мин 1в течение 15 мин.
8.1.4 Надосадочную жидкость, полученную по 8.1.3, фильтруют через бумажный фильтр в колбу.
Полученный прозрачный раствор используют для проведения ИЭФ.
8.2 Приготовление раствора стандартных образцов
Готовят раствор стандартных калибровочных белков в дистиллированной воде в зависимости от
диапазона pH. выбранного для анализа: в 30—40 мкл дистиллированной воды для окрашивания кумас-си
и в 2 см дистиллированной воды для окрашивания серебром.
8.3 Проведение изоэлоктрофокусирования на приборе
8.3.1 Включают систему.
8.3.2 Помещают полиакриламидный гель в систему в соответствии с инструкцией, прилагаемой
к ней.
4