ГОСТ 31487—2012
ным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользова нии
настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный
стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагиваю
щей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины ссоответствующими определениями:
3.1 гидролиз: Расщепление исходного соединения на два более простых в присутствии молекул
воды.
3.2 ферментативный гидролиз: Гидролиз высокомолекулярных соединений под воздействием
катализаторов белковой природы — гидролитических ферментов (гидролаз, класс 3 [1]).
3.3 субстрат: Соединение или вещество, на которое воздействует данный фермент.
4 Метод определения ферментативной активности фитазы
с образованием молибденовой сини
4.1 Характеристика метода
4.1.1 Метод основан на количественном определении содержания неорганических фосфатов
(Р04), образующихся в результате действия фермента фитазы на субстрат — фитат натрия (натриевую
соль фитиновой кислоты) при определенных стандартных условиях, путем их связывания молибдатом
натрия и восстановлением двухлористым оловом с образованием окрашенного в синий цвет комплек са
— молибденовой сини.
Метод используется при возникновении разногласий в качестве арбитражного.
4.1.2 За единицу фитазной активности (1 ед. ФА) принимают количество фермента, катализирую
щее гидролиз фитата натрия собразованием 1мкмоля неорганического фосфата за одну минуту в стан
дартных условиях (температура — 37 °С, значение pH 5,5, продолжительность гидролиза — 15 мин).
4.1.3 Интенсивность окраски измеряют фотоколориметрическим методом при длине волны от 650
до 700 нм.
4.1.4 Количество выделенных неорганических фосфатов определяют по градуировочному графи
ку, построенному какфункция оптической плотности от молярной концентрации фосфатов, мкмоль/см3.
Метод позволяетопределять от 0,05до 0,40 мкмоль/см3фосфатов. Диапазон измерений контроли
руемого показателя от 500 до 8000 ед. ФА.
4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы
4.2.1Для определения ферментативной активности фитазы используют следующие средства
измерений и оборудование:
- фотоэлектроколориметр (ФЭК) любого типа, который обеспечивает измерения при длине волны
от 650 до 700 нм, с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1 % (не более 0,01
единицы оптической плотности);
- pH-метр с набором электродов для измерения в диапазоне от 0 до 14 pH, с пределом допускае
мой погрешности в эксплуатации ±0,1 pH;
- магнитную мешалку любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин-1;
- ультратермостат или водяной термостат сточностью регулирования температуры ± 1°С;
- лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее
7000 мин-1;
- весы лабораторные по ГОСТ 24104, высокого класса точности, с наибольшим пределом взвеши
вания 200 г, ценой поверочного деления 0,1 мг и пределом допускаемой погрешности в эксплуатации
±0,15 мг; с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, ценой поверочного деления 20 мг и пределом
допускаемой погрешности в эксплуатации ± 30 мг;
- водяную баню любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100 ± 1) °С;
- таймер любого типа с погрешностью ± 30 с;
- шкаф сушильный, обеспечивающий температуру нагрева (120 ±5) °С;
- вытяжной шкаф любого типа;
- механическую мельницу, обеспечивающую размалывание исследуемого образца ферментного
препарата до полного прохода пробы через сито;
- сито с диаметром отверстий 1,0 мм, сделанное из металлического проволочного тканого мате
риала.
2