ГОСТ 31487—2012
5.1.4Количество выделенных неорганических фосфатов определяют по градуировочному графи
ку, построенному как функция оптической плотности от молярной концентрации фосфатов, в
мкмоль/см3.
Метод позволяет определять от 0,5 до 2,0 мкмоль/см3фосфатов. Диапазон измерений контролиру
емого показателя от 500 до 8000 ед. ФА.
5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы
5.2.1 Для определения ферментативной активности фитазы с образованием фосфорнованадие-
во-молибденового комплекса применяют средства измерений, вспомогательное оборудование, кото
рые указаны в4.2.1 и 4.2.2.
5.2.2 Для определения ферментативной активности фитазы используют реактивы по 4.2.3, а
также:
- аммоний молибденовокислый по ГОСТ 3765;
- аммиак водный особой чистоты по ГОСТ 24147, раствор массовой доли 25 %;
- кислоту азотную по ГОСТ 4461, раствор массовой доли 25 %;
- аммония метаванадат по ГОСТ 9336;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709.
5.3Подготовка к анализу
5.3.1 Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации 0,1 моль/дм3 с
pH 5,5 проводят по 4.3.1.
5.3.2 Для приготовления ванадиево-молибденового реактива в колбу вместимостью 2 дм3поме
щают 0,6 г аммония метаванадата и растворяют в 440,0 см3горячей дистиллированной воды. Раствор
охлаждаютдо комнатной температуры и при постоянном перемешивании добавляют 560,0 см325 %рас
твора азотной кислоты и25,0 гаммония молибденовокислого. Перемешивают до полного растворения.
Срок хранения при комнатной температуре — один год.
5.3.3 Приготовление раствора субстрата фитата натрия молярной концентрации 5 мкмоль/см3
проводят по 4.3.4.
Раствор готовят вдень проведения анализа.
5.3.4 Приготовление рабочих стандартных растворов фосфатов (Р04) для построения градуиро
вочного графика проводят в следующем порядке.
5.3.4.1 Приготовление основного стандартного раствора фосфатов проводят по 4.3.5.1.
Молярная концентрация фосфатов в стандартном растворе составляет 5 мкмоль/см3.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1мес.
5.3.4.2 Для приготовления серии разведений — рабочих стандартных растворов фосфатов из
основного стандартного раствора фосфорнокислого калия по 4.3.5.1 готовят серию разведений в соот
ветствии с таблицей 2.
Т а б л и ц а 2
Объем стандартного раствора
фосфорнокислого калия молярной
концентрации 5 мкмоль/см3, см3
Объем ацетатного буферного раствора,
см3
Молярная концентрация фосфатов
в растворе, мкмоль/см3
1,0
9,0
0,50
1,5
8,5
0,75
2,0
8,0
1,00
2,5
7,5
1,25
3,0
7,0
1,50
3,5
6,5
1,75
4,0
6,0
2,00
Рабочие стандартные растворы фосфатов готовят в день построения градуировочного графика,
при этом берут по три параллельных разведения для приготовления каждой молярной концентрации
фосфатов.
6