ГОСТ Р 53910— 2010
За результат подсчета плотности (численности) клеток водорослей принимают среднеарифмети
ческое значение не менее двух определений для каждой заданной кратности разбавления (концентрации)
анализируемой пробы, в том числе и контрольной пробы, которое вычисляют с допускаемым отклонением не
более ± 7 %.
ДВ.2 Определение плотности (численности) клеток водорослей с использованием метода флуо-
риметрии
ДВ.2.1 Подготовка прибора к измерениям
Прибор готовят к работе в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации.
Устанавливают следующие параметры работы прибора:
- температура 20 "С;
- интенсивность флуоресценции клеток водорослей в области длин волн 400 — 500 нм при возбужде
нии флуоресценции и в области длин волн 650 — 750 нм при регистрации флуоресценции.
ДВ.2.2 Градуировка прибора
Градуировку прибора выполняют с использованием средств программного обеспечения прибора с при
менением градуировочных растворов по ДВ.2.3. При этом коэффициент линейной корреляции полученных
градуировочных характеристик должен быть не менее 0.99.
ДВ.2.3 Приготовление градуировочных растворов
Градуировочные растворы готовят следующим способом: подготовленную культуру водорослей (см.
приложение ДА) вносят в колбы вместимостью 250 см3 и последовательно разбавляют питательной сре дой
(например, для метода А — средой Гольдберга) в соотношении:
- 50 слг5 суспензии водорослей и 50 см3 питательной среды (разбавление в два раза):
- 25 слг суспензии водорослей и 75 см3 питательной среды (разбавление в четыре раза):
-16.6 см2 суспензии водорослей и 83.4 см3 питательной средь/ (разбавление в шесть раз): -
12.5 слг3 суспензии водорослей и 87.5 см3 питательной среды (разбавление в восемь раз): -1
0 см3 суспензии водорослей и 90 см3 питательной среды (разбавление в 10 раз):
- 5 см3 суспензии водорослей и 95 см3 питательной среды (разбавление в 20 раз):
- 2.5 см3 суспензии водорослей и 97.5 см3 питательной среды (разбавление в 40 раз):
-1.66 см3 суспензии водорослей и 98.34 см3 питательной среды (разбавление в 60 раз): -
1.25 слг суспензии водорослей и 98.75 см3 питательной среды (разбавление в 80 раз): -1.0
см3 суспензии водорослей и 99
с
а
г
3
питательной среды (разбавление в 100 раз):
-0.1 см3 суспензии водорослей и 99.9 см3 питательной среды (разбавление в 1000 раз).
Холостая проба — питательная среда (например, для метода А — среда Гольдберга).
ДВ.2.4 Установление градуировочной характеристики
Колбы с подготовленными по ДВ.2.3 градуировочными растворами закрывают ватно-марлевыми проб
ками. встряхивают, помещают в люминостат или климатостат и выдерживают 15 мин при температуре
(20 ± 2) ’С и освещенности 3000 — 6000 лк. после чего содержимое каждой колбы (вклкная холостую пробу,)
тщательно перемешивают.
Затем с использованием счетной камеры Горяева под микроскопом подсчитывают (см. ДВ.1) плот
ность (численность) клеток водорослей в каждой колбе, отбирая не менее двух аликвот, и рассчитывают
среднеарифметическое значение. После этого в соответствии с инструкцией (руководством) по эксплуа
тации прибора измеряют значения интенсивности флуоресценции В., не менее двух аликвот из каждой
колбы, соответствующих полученным по ДВ. 1 значениям плотности (численности) клеток водорослей в
каждой колбе.
Устанавливают градуировочную характеристику в виде зависимости среднеарифметических значе
ний из изшреннь/х значений интенсивности флуоресценции (за вычетом среднеарифметического значения
интенсивности флуоресценции холостой пробы) от среднеарифметических значений плотности (числен
ности) клеток водорослей, полученных по ДВ.1. При этом:
- если прибор снабжен компьютерной (микропроцессорной) системой сбора и обработки информации,
то градуировочную характеристику устанавливают в соответствии с руководством (инструкцией) по
эксплуатации прибора:
- если прибор не предусматривает проведения автоматизированной градуировки, то угловой коэффи
циент (наклон) градуировочной характеристики Ь. сл^/клвток. рассчитывают по формуле
i x , дв,
ь
/-1
(ДВ.2)
£ ( * ,)2
1-1
где X,плотность (численность) клеток водорослей в t-м градуировочном растворе, клеток/см3:
ДВ, среднеарифметическое значение интенсивности флуоресценции /-го градуировочного раствора
за вычетом среднеарифметического значения интенсивности флуоресценции холостой пробы:
iчисло использованных градуировочных растворов (см. ДВ.2.3).
28