ГОСТ Р 53910— 2010
Приложение ДА
(обязательное)
Методы культивирования водорослей
ДА. 1 Культивирование водорослей для метода А
ДА. 1.1 Культивирование водорослей проводят в конических колбах вместимостью 250 см3 на пита
тельной среде Гольдберга в условиях, соответствующих условиям проведения тестирования проб по 5.4.3.3.
ДА. 1.2 Культивируя водоросли, периодически обновляют мапгючную культуру, пересевая ее на свеже
приготовленную питательную среду [см. А. 1.2 (приложение А)] не реже одного раза в 10 сут. Обновление
культуры проводят следующим способом: в стерильную колбу вместимостью 250 см3 со свежей питатель
ной средой обьемом 150 см3 над пламенем спиртовки вносят 15 — 20 см3 верхнего ростового слоя маточной
культуры (содержимое исходной культуры при этом не перемешивают). После пересева колбу закрывают
стерильной ватно-марлевой пробкой и бумажным колпачком, перемешивают и выдерживают в условиях
по 5.4.3.3. При этом плотность (численность) клеток водорослей в колбе должна составлять около
1.0 ■10s — 1.5 ■ 1№ клеток/см3. В течение 10 сут водоросли периодически перемешивают, встряхивая колбы
вручную один-два раза в сутки.
В случав замедления роста клеток водорослей к питательной среде добавляют витамин 8 ,г (одну или
две капли на 1 дм3 среды).
ДА. 1.3 Для тестирования используют культуру водорослей в экспоненциальной фазе роста и заданной
плотности (численности) клеток водорослей. Для этого за 3 сут до начала тестирования в колбу вмести
мостью 250 см3 со свежей питательной средой объемом 100 см3 над пламенем спиртовки вносят 20 см3
суспензии водорослей из маточной культуры (см. ДА. 1.2). Затем колбу закрывают стерильной ватно-марле вой
пробкой и бумажным колпачком, перемешивают вручную и выдерживают в условиях no 5.4.3.3 в течение 3 сут.
При этом плотность (численность) клеток водорослей в подготовленной к тестированию культуре должна
находиться в преде/iax от 2.0 ■ 10е до 2.5 ■1САклеток/см3.
ДА. 1.4 Непосредственно перед тестированием в подготовленной по ДА. 1.3 трехсуточной культу
ре водорослей определяют в соответствии с требованиями ДВ. 1 (приложение ДВ) плотность (числен
ность) клеток в 1 см3 суспензии водорослей, используя для этого не менее двух аликвот суспензии.
Полученное значение плотности (численности) клеток водорослей должно находиться в пределах от 2 ■ 10s до
2.5 - 10е клеток/см3. Если полученное значение менее 2.0 ■ 10е клеток/см3. то увеличивают продолжитель ность
культивирования водорослей (см. ДА. 1.3) еще на сутки. Затем рассчитывают необходимый объем суспензии
для внесения в каждую колбу с контрольной и анализируемой пробой при тестировании.
П р и м е ч а н и е — Чтобы получить в начале тестирования плотность (численность) клепхж водорос
лей в пределах от 2 ■ 104 до 2.5 ■ 10* клеток/см3. достаточно в каждую емкость внести 1,0 см3 суспензии
водорослей из культуры, плотность (численность) которой находится в пределах от 2 ■ ТО® до 2,5 • ТО5
клеток/см3.
ДА.2 Культивирование водорослей для метода Б
ДА.2.1 Культивирование водорослей проводят в конических колбах вместимостью 250 см3 на пита
тельной среде [см. А.2.2 (приложение А)] в условиях тестирования ло 6.4.1.
ДА.2.2 Необходим регулярный пересев культур водорослей, для Sceletonema costatum (Greville) Cleve его
осуществляют один раз в 7 сут; для Phaeodactyium tricomutum BoWin — один раз в 14 или 21 сут. При этом
пересев культур водорослей проводят аналогично ДА. 1.2 в условиях по 6.4.1 с использованием питательной
среды по А.2.2 (приложение А).
ДА.2.3Для тестирования культуру водорослей готовят следующим способом: в питательную среду
[см. А.2.2 (приложение А)] добавляют такой объем суспензии водорослей из маточной культуры водорослей
(
са
». ДА.2.2). чтобы получить начальную плотность (численность) клеток, соответствующую диапазону от 2.0 • 103
до 104 клеток/см3. и выдерживают в условиях тестирования по 6.4.1 в течение 3 сут.
ДА.2.4 Культура водорослей, подготовленная по ДА.2.3, в течение тестирования должна обеспечить экспо
ненциальный рост водорослей. Непосредственно перед тестированием определяют плотность (численность)
клеток в подготовленной культуре водорослей в соответствии с требованиями ДВ. 1 (приложение ДВ) и рассчи
тывают необходимый объем суспензии водорослей для внесения в каждую колбу с контрольной и анализируе
мой пробой для тестирования.
ДА.З Адаптация водорослей к воде различной минерализации (солености)
ДА.3.1 Природная морская вода в разных морях и отдельных акваториях моря имеет различную минера
лизацию (соленость), поэтому необходимо иметь культуру водорослей, заранее адаптированную к разной
минерализации (солености) анализируемой пробы воды (водной вытяжки), подлежащей тестированию, и
содержать ев в заданных условиях для культивирования.
19