ГОСТ 7702.2.5-93
2.2.1 Для определения индола по стенке пробирки с суточной культурой на пептонной воде
по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.2, инкубированной при температуре (37+1) °С, добавляют
5—10 капель реактива Эрлиха или реактива Ковача по ГОСТ 28560. При наличии индола с реактивом
Эрлиха через 5 мин в пограничном слое образуется ярко-красное кольцо, с реактивом Ковача через
10 мин после взбалтывания поверхность окрашивается в темно-красный цвет.
Листереллы индола не образуют.
2.2.2 Для определения сероводорода в пробирку с суточным посевом на пептонную воду
помещают под пробку полоску фильтровальной бумаги по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.21.
Культуру инкубируют в течение 24—72 ч при температуре (37+1) °С. При выделении микроорганиз
мами сероводорода бумажка чернеет от образующегося сульфата свинца.
Листереллы сероводорода не образуют.
2.2.3 Для обнаружения каталазы в пробирку с культурой на мясо-пептонном бульоне, инку
бированной в течение 12—24 ч при температуре (37+1) °С, добавляют 1 см3 раствора перекиси
водорода массовой концентрации 100 г/дм3. При наличии каталазы жидкость вспенивается.
Листереллы образуют каталазу.
2.2.4 Для определения реакции на желатин проводят посев уколом в столбик среды по
ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.35, погружая петлю с исследуемой культурой вглубь питательной
среды до дна пробирки. Культуру инкубируют в течение 18—24 ч при температуре (37+1) °С. Вместе с
опытными пробирками в термостат ставят одну или две пробирки с незасеянным желатином для
контроля. После инкубирования пробирки, вынутые из термостата, опускают в холодную воду или
ставят в холодильник. После застудневания желатина в контрольных пробирках приступают к
просмотру опытных. Там, где произошло расщепление белков желатина, отмечается его разжижение.
При отсутствии разжижения желатина в опытных пробирках их вновь помещают в термостат и
инкубируют в течение 48—72 ч при температуре (37+1) °С с ежесуточным просмотром.
Листереллы желатин не разжижают.
2.3 Для подтверждения принадлежности культуры к листереллам проводят биопробу на белых
мышах или морских свинках. Белых мышей заражают внутримышечно, подкожно или интраперитоне-
ально в дозе 0,3—1 см3в концентрации 105—106 КОЕ/см3суточной культуры с мясо-пептонного агара,
смытой стерильным физиологическим раствором. У погибших в течение 2—5 сут животных обнаружи
вают многочисленные очаги некроза в печени, селезенке, почках и миокарде.
Морским свинкам на слизистую оболочку глаза вносят 1—2 капли инокулята. Через 18—24 ч
появляется отек века, гиперемия, слезотечение, через 36—72 ч веко опухает, из глаза выделяется
гнойный экссудат.
2.4 Метод выявления листерелл при помощи люминесцирующих антител используют, во-пер
вых, в качестве экспресс-метода для предварительного определения листерелл с последующим
подтверждением бактериологическим методом; во-вторых, для идентификации выделенной культу
ры, что исключает в ряде случаев определение их культуральных и биохимических свойств.
2.4.1При экспресс-методе из свежего материала (мышц, паренхиматозных органов, костного,
головного мозга) готовят взвесь в физиологическом растворе в соотношении 1:5. После осаждения
крупных частиц взвеси из разных участков ее поверхности готовят по три мазка.
Место нанесения материала очерчивают карандашом по стеклу с обратной стороны; подсуши
вают мазки на воздухе, маркируют, фиксируют этиловым ректификованным спиртом с массовой
долей 96 %. При этом стекла с мазками, отделенные друг от друга, погружают в
вертикальном положении на 15 мин в сосуд со спиртом. Изъятые из сосуда мазки после
испарения спирта ополаскивают физиологическим фосфатно-буферным раствором по ГОСТ
7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.23. Допускается ополаскивать мазки физиологическим раствором или
дистиллированной водой без фосфатного буфера.
На слегка подсушенный мазок наносят 1—2 капли соответствующей люминесцирующей
сыворотки, подготовленной по инструкции, прилагаемой к сывороткам.
Мазки с сывороткой помещают во влажную камеру (в чашки Петри с влажной фильтровальной
бумагой на дне) и выдерживают в термостате в течение (30+1) мин при температуре (37+1) °С. Затем
сыворотку отмывают, погружая на 20 мин мазки в кювету с физиологическим фосфатно-буферным
раствором. Раствор в кювете помешивают и меняют через 10 мин. Отмытые мазки ополаскивают
дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
На поверхность мазка наносят каплю глицерина, накрывают покровным стеклом, излишек
глицерина удаляют. На покровное стекло наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло или
его заменитель и проводят люминесцентную микроскопию.
65
2