ГОСТ 29184-91 С. 2
стекла покровные по ГОСТ 6672;
термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 ’С, позволяющий поддерживать заданную
температуру с погрешностью ± 1*С;
бриллиантовый зеленый;
генцианвиодет:
диметил-л-феннлендиамин;
желчь говяжья сухая или натуральная;
метиловый фиолетовый;
N, N, N’.
Л" - тетраметил-пара-фениленднаминадигидрохлорид;
индикаторные бумажки на оксндазу, выпускаются Дагестанским НПО «Питательные среды»
и Горьковским НИИ эпидемиологии и микробиологии.
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
j
j
3.1. Приготовление растворов
3.1.1. Щелочной раствор бромкрезолового пурпурного концентрацией 10 г/дм5: 1 г бромкре-
золового пурпурного переносят в фарфоровую ступку с 19см5 раствора гидроокиси натрия концентра
цией 0,1 моль/дм’ и после растворения добавляют 80 см5дистиллированной воды. Раствор хранят в
закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
3.1.2. Раствор бриллиантового зеленого концентрацией 5
г/дм3:
0.5 г бриллиантового зеленого
переносят в мерную колбу вместимостью 100см5и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор
хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
3.1.3. Раствор генцианвиолета или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового
концентрацией 10 г/дм5: I г одной из анилиновых красок переносят в мерную колбу вместимостью
100 см5и доводят дистиллированной водой до метки.
3.1.4. Растворы и реактивы для окраски по Граму по ГОСТ 10444.1.
3.1.5. Растворы для определения оксидазы готовят непосредственно перед применением.
3.1.5.1. Раствор V. iV,
V*
N’
- тетраметил-пара-фениленднамина дигидрохлорида концентрацией
10 г/дм’: 1г реактива переносят в мерную колбу вместимостью 100 см’, растворяют вдистиллирован
ной воде температурой 10—15‘С.
3.1.5.2. 30-40 мг а-нафтола растворяют в 2.5 см ’ректификованного этилового спирта, добавля
ют 7,5 см5дистиллированной воды и 40- 60 мгдиметил-л-фенилендиамина.
3.2.Приготовление питательных сред
3.2.1. Среда Кесслера: 10.0 г пептона. 2.5 г глюкозы. 5,0 г сухой говяжьей желчи или 50 см5
натуральной желчи, 2.0 см5 раствора генцианвиолета или кристаллического фиолетового, или метило
вого фиолетового, приготовленных по п. 3.1.3, добавляют к 1000 см5дистиллированной воды, тща
тельно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1—2 мин, фильтруют
через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45—55 "С, устанавливают pH таким образом, чтобы
после стерилизации он составлял при 25 *С (7.3 ± 0,2), рахчнвают по 10 см5 в пробирки с
поплавками и стерилизуют 20 мин при температуре (114 ± I) *С.
3.2.2. Буферный глюкозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью: 10.0 г пептона.
5.0 г глюкозы, 6.45 г двузамешенного фосфорнокислого безводного натрия, 2,0 г однозамещенного
фосфорнокислого безводного калия, 20,0 г сухой говяжьей желчи или 200 см’ натуральной желчи,
3.0 см’ раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по п. 3.1.2, добавчяют к 1000 см5
дистиллированной воды, тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят
1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 *С и устанавливают pH
таким образом, чтобы он составлял при 25 ’С (7.2 ±0.1), после чего среду доводят до кипения.
Среда не подлежит стерилизации в автоклаве, ее разливают по 10 см’ в стерильные пробирки с
поплавками.
3.2.3. Бульон Мак-Конки: 20,0 г пептона. 10,0 г глюкозы, 5.0 г хлористого натрия, 5,0 г сухой
говяжьей желчи или 50см’ натуральной желчи, 1,0см5раствора бромкрезолпурпура. приготовленного
по п. 3.1.1, добавляют к 1000 см’ дистиллированной воды, нагревают на слабом огне до кипения,
кипятят 1—2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 ’С и устанавливают
pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 ‘С (7,2 ± 0,1), разливают по 10см5
в пробирки с поплавками и стерилизуют 15 мин при температуре (121 ± 1) *С.
91