С. 5 ГОСТ 14260-89
3.2.2.2. Приготовление раствора 2,6-дихлорхиион -4-хлоримида с массовой
долей 0,2 %
(0.20±0,01) г 2.6-дихлорхннон-4-хлорнмида растворяют в этиловом спирте с объемной долей
95 % в мерной колбе вместимостью 100 см’ и доводят объем раствора тем же спиртом до метки.
Раствор хранят в защищенном от света месте при температуре 4—8 “С не более 3 мес.
3.2.2.3. П р и г о т о в л е н и ер а с т в о р аэ т и л о в о г ос п и р т асобъемной
дол ей70%
Смешивают 675 см3этилового спирта с объемной долей 95 % и 325 см3воды.
3.2.2.4. П р и г о т о в л е н и е смеси эти л о в о г о спирта с хл о р о фо р мо м (1:2)
К 1объему этилового спирта приливают 2 объема хлороформа и хорошо перемешивают.
3.2.3. Проведение ана.шза
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих через сито с отверс
тиями диаметром 0,1 см по ТУ 23.2.2067, ТУ 23.2.2068.
(10.00±0,01) г сырья помешают в коническую колбу с пришлифованной пробкой вместимостью
250 см’ и приливают 100 см’ раствора этилового спирта с объемной долей 70 %, закрывают пробкой
и встряхивают на аппарате для встряхипания с числом качаний 120—150 в минуту в течение 30 мин.
Спиртоводное извлечение фильтруют через ватный тампон. Первую порцию фильтрата (1—2 см’)
отбрасывают. Отбирают пипеткой 50 см’ фильтрата, что соответствует 5 г исходного сырья,
поме шают в делительную воронку вместимостью 250 см3, приливают 15 см’ дистиллированной
воды и дважды извлекают сумму капсаиципондов хлороформом по 40 ем’ в течение 3 мин
каждый раз. После каждого извлечения жидкости дают в воронке расслоиться в течение К) мин.
Хлороформные извлечения сливают порциями (25—30 см’) в круглодонную колбу вместимостью 50
см3и отгоняют хлороформ на кипящей водяной бане под вакуумом при остаточном давлении 2,6
104—4,0 104 Па (200—300 мм рт. ст.) до объема 1—2 см3. Колбу с остатком охлаждают и остаток
количественно переносят в мерную колбу вместимостью 10см3смесью этилового спирта с
хлороформом по 1—2см3 и доводят объем раствора этой же смесыо до метки (раствор А).
Две пластинки «Силуфол* УФ-254 размером 15 х 15 см тонкой иглой разделяют каждую на
шесть равных полос шириной 2,5 см и на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки отмечают
стартовую линию. На каждую пластинку наносят пипеткой на пять точек 0,025 см’ раствора А,
шестую оставляют контрольной. Пластинки высушивают на воздухе в течение 20 мин и хромато
графируют восходящим способом в камере с диэтиловым эфиром. Когда фронт растворителя дойдет
до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин и в УФ-свете (при
длине волны 254 нм) предварительно отмечают верхнюю и приблизительно нижнюю границы
полосы с темно-фиолетовыми зонами суммы капсаициноидов. Затем вдоль хроматограммы отрезают
полоску с зоной суммы капсаициноидов. обрабатывают ее последовательно раствором 2,6-днхлор-
хинон-4-хлоримида с массовой долей 0.2 % и парами аммиака. На полоске проявляется одно голубое
пятно. Проваленную полоску прикладывают к пластинке и по положению голубого пятна уточняют
нижнюю границу полосы с зонами суммы капсаициноидов. Вырезают полосу с зонами, содержа
щими сумму капсаициноидов, разрезают ее на четыре участка, не нарушая целостности границ
отдельных зон. Участки с зонами помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 см3, туда же
приливают 5 см’ этиловогоспирта с объемной дачей 95 %, осторожносмывая края колбы, закрывают
колбу притертой пробкой и встряхивают в течение 15 мин на аппарате для встряхивания с числом
качаний 120—150 в минуту. Элюаты помешают в пробирки для центрифугирования и центрифуги
руют со скоростью 8000 мин-1 в течение 5 мин и измеряют оптическую плотность надосадочной
жидкости на спектрофотометре при длине волны 280 нм в кювете с толщиной слоя 1.0 см. В качестве
раствора сравнения используют элюат с контрольной полосы хроматограммы, равной по площади
полосе с зонами капсаициноидов.
3.2.4. Обработка результатов
3.2.4.1. П о с т р о е н и ег р а д у и р о в о ч н о г ог р а ф и к а
На пластинку «Силуфол» УФ-254 на пять точек наносят по 0.01 см3 (0.020 r/мг) раствора
стандартного образца капсаиинна. На последующие пластинки наносят по 0.02 см! (0.040 г/мг);
0,03 см’ (0.060 г/мг); 0.04 см’ (0,080 г/мг) раствора стандартного образца капсаицина на пять точек.
Шестую точку на всех пластинках остааляют чистой для приготовления раствора сравнения.
Хроматографирование и элюирование проводят по п. 3.2.3, используя для элюирования все пять
зон. При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают количество капсаици
ноидов, нанесенное на хроматограмму в пяти точках (0,100; 0,200; 0.300; 0.400) в граммах на
миллиграмм, на оси ординат — значения соответствующих оптических плотностей.
76