ГОСТ Р 51257-99
10,2
6.5 Стакан химический номинальной вместимостью 100 см3.
6.6 Мешалка магнитная угловой скоростью вращения от 400 до 1200 мин-
6.7 pH-метр диапазоном измерений активной кислотности от 1до 14 pH и погрешностью из
мерений *0.05 pH.
6.8 Дозаторы пипеточные объемами 100, 50 и 25 см3и относительной погрешностью дозиро
вания 11 % |1| или пипетки градуированные вместимостью 2.0; 1,0; 0,5; 0.2: 0,1 и 0.02 см5и допуска
емой относительной погрешностью il %.
6.9 Колба мерная номинальной вместимостью 100 см3 и допускаемой относительной погреш
ностью%.
6.10 Фильтры гофрированные бумажные диаметром 15 см.
6.11 Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощаю
щего слоя 1см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм.
6.12 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для
перемешивания содержимого фотометрической кюветы.
6.13 Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический для измерений при длинах волн 334.
340 или 365 нмдопускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ±1 %.
7 Отбор проб
Отбор проб - по ГОСТ 26809.
8 Проведение испытания
8.1 П о д г о т о в к а пробы
Перед испытанием пробу измельчают и гомогенизируют на лабораторном измельчителе.
8.2 П р и г о т о в л е н и е р а с т в о р а пробы
8.2.1 Навеску гомогенной пробы массой (2,0000±0,0001) г, взвешенную в химическом стака
не, смешивают с 60 см3горячей дистиллированной волы температурой от 80 до 90 ”С.
8.2.2 Смесь перемешивают от 5 до 10 мин магнитной мешалкой.
8.2.3 Охлажденную смеськоличественно переносят в мерную колбу и доводят объем смеси до
метки дистиллированной водой.
8.2.4 После тщательного перемешивания смеси мерную колбу со смесью выдерживают 10 мин
в ледяной бане или в морозильном отделении холодильника по 6.2.
8.2.5 Затем содержимое мерной колбы фильтруют через гофрированный бумажный фильтр.
Мутный фильтрат используют в определении по 8.3.
8.3 О п р е д е л е н и е
Определение проводят при комнатной температуре. Максимум оптической плотности НЛДН
находится при длине волны 340 им.При использовании спектрофотометра переменной длины вол ны
измерения проводят в максимуме оптической плотности.При использовании спектрофотометра с
ртутной лампой измерения проводят при длинах волн 334 или 365 нм.
Фильтрат по 8.2.5, растворы ферментов и коферментов. а также буферные растворы дозируют
мерными пипетками или автоматическими дозаторами.
8.3.1 Контрольное испытание
8.3.1.1 В первую фотометрическую кювету последовательно вносят 1,00 см3буферного раство
ра по 5.1. 0.10 см3 раствора НЛДН по 5.2, 0.02 см3 суспензии ферментов L-МДГ и L-ЛДГ по 5.3 и
2,00 см3дистиллированной воды.Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или
стеклянной палочкой и выдерживают при комнатной температуре 5 мин.
8.3.1.2 Измеряют оптическую плотность (/1,)к раствора относительно оптической плотности
воздуха.
8.3.1.3 Вкювету добавляют 0,02 см3 раствора ЦЛ по 5.4.Содержнмое перемешивают пластико
вым шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают 10 мин при комнатной температуре.
8.3.1.4 Измеряют оптическую плотность (Л,)к раствора относительно оптической плотности
воздуха.
8.3.2 Определение лимонной киаюты
8.3.2.1 Во вторую фотометрическую кювету последовательно вносят 1.00 см’буферного рас
твора по 5.1, 0,10 см3раствора НЛДН по 5.2, 0,02 см3суспензин фермеров L-МДГ и L-ЛДГ по 5.3,
0,10 см3 фильтрата по 8.2.5 и 1.90см’ дистиллированной воды.Содержимое кюветы перемешивают
пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают 5 мин при комнатной темпера
туре.
27
3