ГОСТ Р 51257-99
В ходе анализа протекают следующие ферментативные реакции:
лимонная кислота — ——►щавелевоуксусная кислота + уксусная кислота,(О
щавелевоуксусная кислота
-------
> пировиноградпая кислота + СО,,(2)
щавелевоуксусная кислота + НДДН + Н‘ ——>L-яблочная кислота + НАД*,(3)
пнровиноградная кислота + НЛДН + Н ’ — ь~ддг—>L-молочная кислота + НАД*.(4)
5 Реактивы
При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.
Вода, используемая для приготоаления растворов ферментов, должна бытьбидистиллирован-
ной.
Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб,
должна бытьдистиллированной или деминерализованной.
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов дтя определения
лимонной кислоты при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.
Препарат глицилглинин должен содержать не менее 90 % основного вещества.
5.1 Г л иц и л г л и ц и н о в ы й б у ф е р н ы й р а с т в о р а к т и в н о й к и с л о т н о с т ь ю
7,8 pH
7,13 г глицилглицика растворяют в 70 см* дистиллированной воды по ГОСТ 6709.Активную
кислотностьраствора устанавливают равной 7.8 pH приблизительно 15 см3 раствора гидроокиси на
трия по 5.5, добавляют 10 см3раствора хлорида цинка по 5.6 и доводят общий объем раствора дис
тиллированной водой до 100 см3.Буферный раствор устойчив при температуре 4 “С 1 мес.
5.2 Ра с т в о р НЛДН
0,030 г динатриевой соли (Ижкотинамидадениндинуклеотида ф-НАДН-Na,, массовая доля
основного вещества не менее 98 %) и 0,060 г углекислого кислого натрия по ГОСТ4201 растворяют
в 6 см3дистиллированной воды.Раствор устойчив при температуре 4 *С I мес.
5.3 Су с п е н з и я ф е р ме н т о в L-МДГ и L-ЛДГ
0.005 г сухоголиофилизата L-МДГ из свиного сердца активностью 6000 Есмешивают с 1см3рас
твора сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с (NH4),S04 = 3,2 моль/дм3.
0,005 г сухого лиофилизата L-ЛДГ активностью 2750 Е смешивают с I см3 раствора сернокис
лого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации c(NH.),S04= 3.2 моль/дм3.
Для приготовления суспензии ферментов L-МДГ и L-ЛДГ смешивают 0.4 см3раствора сер
нокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации c(NH4),S04= 3,2 моль/дм3. 0.1 см’сус-
пензии L-МДГ и 0,4 см3суспензии L-ЛДГ.Суспензия ферментов устойчива при температуре 4 ’С 12
мес.
5.4 Ра с т в о р ЦЛ
0,168 г сухого лиофилизата ЦЛ из Aerobacter aerogenes активностью 42 Е растворяют в I см3
бидистиллированной воды температурой 4 ‘С.Раствор устойчив при температуре 4 *С одну неделю,
в замороженном состоянии при минус 20’С — I мес.
5.5 Ра с т в о р г и д р о о к и с и н ат рия
8 г гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.
5.6 Раствор хлорида ци нка
0.080 г хлорида цинка по ГОСТ 4529 растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.
6 Аппаратура
Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.13.
6.1 Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г и допус
каемой погрешностью ±0,1 мг.
6.2 Баня ледяная или холодильник с морозильным отделением.
6.3 Измельчитель (гомогенизатор) лабораторный угловой скоростью вращения от 500 до
3000 мин-1.
6.4 Пробирки диаметром 2,5 см и длиной 20 см.
226