ГОСТ 1923-78 С. 4
Твин.
Водадистиллированная по ГОСТ6709—72.
3.4.2. Подготовкак апатзу
3.4.2.1. Приготовление питательной среды.
Вкачестве основы для питательной среды используют фосфатный буферный раствор с pH 5.0.
Для его приготовления взвешивают 6,664 г однозамещенного фосфорнокислого калия и 0,142 г двуза-
мешенного фосфорнокислогокалия. Растворяют их в дистиллированной поде в мерной колбе вмести
мостью 1дм5.
Вприготовленный буферный раствор добавляют 1% глюкозы. 2 % пептона и 1,5 % агара.
После растворения смесьдоводятдо кипения, кипятят в течение 2 мин, фильтруют через ватно
марлевый фильтр, разливают в колбы вместимостью 100 и 200см1и стерилизуют при давлении 70 кПа в
течение 20 мин.
3.4.2.2. Приготовление суспензии тест-культуры.
Для получения рабочей суспензии культуру Вас.coagulans № 15, выращенную насухом питатель
ном агаре (СПЛ) в течение 20—24 ч при температу ре 55 ‘С, переносят петлей в пробирку с 10 см5
стерильной воды.
Рабочую суспензию тест-культуры готовят непосредственно перед засевом питательной среды в
лотках. Количество клеток всуспензии должно соответствовать 10единицам бактериальных стандарт
ных образцов мутности.
При получении более концентрированной суспензии добавляют небольшими порциями воду,
при получении менее концентрированной —вносятдополнительное количество культуры.
3.4.2.3. Приготовление основного раствора низина.
12 см5низина активностью 1млн единиц Ридинга в I г (25у в I мг) растворяют в 10 см*. 0,02 и.
соляной кислоты при температуре 80 ’С и затем в мерной колбе разбавляют до 250 см* фосфатным
буферным раствором с pH 5.0. При атом получают основной раствор низина активностью 48 мг/дм3.
Из основного раствора низина готовят его последующие разведения в фосфатном буферном
растворе с pH 5.0 до концентрации мг/дм3: 12, 10. 8, 6, 4 в соответствии с табл. 3.
Т а б л и ц а 3
О с н о в н о й р а с т в о р , с м ’
Ф о с ф а т н ы й б у ф е р н ы й р а с т в о р , с м ’
К о н и с н т р а и к я т о н н а , м г /а м !
1,0
1,0
1,0
1,0
0,5
3,0
3.8
5.0
7,0
5.5
12
10
8
6
4
Полученные разведения используют при построении градуировочной кривой, по которой опре
деляют остаточное количество низина в продукте.
3.4.2.4. Подготовка пробы канализу
Сгущенное молоко разводят 0,02 н. раствором соляной кислоты всоотношении 1:4(8 см3молока
и 32 см3кислоты) в химическом стакане вместимостью 50см5. Кислотность полученной смеси доводят
концентрированной соляной кислотой до pH 2.0. Смесь нагревают до кипения и охлаждают до 20 ’С.
Часть смеси разводят в 5 раз фосфатным буферным раствором с pH 5.0. Полученное разведение
используют в качестве испытуемой пробы.
Другую часть смеси доводят0.5 и. раствором едкого натрадо pH 11.0. выдерживают втермостате
при 55 *Св течение 2 ч и охлаждают до 20 ’С. Кислотность смеси снова доводят до pH 2.0 и разводят
фосфатным буферным раствором с pH 5,0 в 5 раз. При этом имеющийся в продукте низин
разрушает ся, другие антибиотики, присутствующие в молоке, не инактивируются. Обработанная
таким образом часть смеси является контрольной пробой.
3.4.3. Проведениетшиза
3.4.3.1. В горизонтально установленный стерильный металлический лоток заливают 200см5 пита
тельной среды.
3.4.3.2. В колбу со 100 см* расплааленной питательной среды добавляют I см‘ твина-20 или
твина-80, охлаждают до 55 *Си вносят 2 см’суспензии культуры Вас. coagulans № 15, приготовленной
по п. 3.4.2.2. Содержимое колбы выливают на нижний застывший слой питательной среды.
5
*