ГОСТ 28085-89 С. 6
Посевы инкубируют в течение 18 ч при (37 ± 0.5) ’С. Полученную культуру из обеих пробирок переносят
во флакон вместимостью 20—30 см3(кусочки мяса или печени нс должны попадать во флакон) и исигрифуги-
руют в течение 20 мин частотой врашения 3000“*. Затем отсасывают надосадочиую жидкость, а в
полученную биомассу добавляют раствор для разведения культуры, перемешивают и переносят в пробирку
для подведения под единый оптический стандарт мутности, соответствующий 10 единицам.
После этого суспензию культуры no I ем-’ высевают на 10—15 пробирок с 10 ем3 предварительно регене
рированной питательной среды для получения споровой культуры.
Посевы инкубируют в течение 48 ч при (37 z 0.5) ’С. после чего содержимое пробирок перемешивают с
помошью стерильной пипетки и делают мазки полученной культуры, мазки окрашивают I %-ным раствором
гсниианвиолста 30 и мнкроскопируют. Количество спор (.9) в процентах вычисляют по формуле
S = — 100.
УУ
j
8
где я —число спор в трех—пяти полях зрения:
V—общее число {нс менее 100) сосчитанных клеток (палочки и споры) в трех—пяти полях зрения:
100 —постоянный коэффициент.
Пробирки с культурой, содержащей нс менее 5
%
спор, хранят при 4
’С— ‘С.
Для получения рабочей культуры
Cl. Oedem
aliens
198
споровую культуру перемешивают пипеткой и по
I см3 пересевают на
2—3
пробирки с
10
см3 среды Тароици. Посевы инкубируют в течение 24—48 ч при
(37
z
0,5)
’С до обнаружения отчетливо видимого роста культуры в виде диффузного помутнения среды с
четко выраженной верхней прозрачной зоной. После чего производят второй пересев тест-штамма на
2—3
пробирки с той же средой, инкубируют в течение
17—19
ч при
(37 ± 0.5)
‘С и используют для оценки
ростовых свойств тиогликолевой среды и МПБ под вазелиновым маслом.
2.3. П р о в е д е н и е и с п ы т а н и я
Рабочую культуру, выращенную в среде Тароццн (2-й пассаж), центрифугируют и подводят поя единый
оптический стандарт мутности.
Из полученной суспензии I см3 культуры пипеткой переносят в пробирку, содержащую 9 см3 раствора
для разведения культуры (разведение 10_|). опуская пипетку в раствор. Таким же образом последовательно по
лучают десятикратные разведения культуры до шссюй пробирки (10“6>включительно.
Нс допускается выдерживание культуры в среде для разведения (до посева) более 30 мин.
Для посева на испытусх|ую пробу используют три последних разведения культуры (I0--1. 10-1. КГ6). Из
каждого указанного разведения, начиная с последнего, по 0.5 см3взвеси вносят в три пробирки с 10 см3тио
гликолевой среды или мясо-псптонного печеночного бульона под вазелиновым маслом (погружая пипетку в
среду). Посевы инкубируют в течение 48 ч при (37 ± 0.5) ’С, после чего проводят учет результатов.
2.4. О ц е н к а р е з у л ь т а т о в
Среду признают годной по ростовым свойствам, если нс позднее чем через 48 ч инкубации посевов визу
ально обнаруживают рост Cl. Oedomatiens 198 в разведении культуры КГ5.
Допускается отсутствие роста в одной из пробирок, засеянной из разведения КГ5, если отмечается рост в
пробирках из разведения КГ6(рост культуры через 24 ч наблюдается в виде отдельных колоний шарообразной
формы, через 48 ч —в виде диффузного помутнения среды с четко выраженной прозрачной зоной в верхней
части столбика среды).