С. 5 ГОСТ 28085-89
Масло иммерсионное по ГОСТ 13739.
Спирт этиловый ректификованный 96 %-ныЙ по ГОСТ 5962.*
Эфир этиловый.
Генцианвиолет, раствор с массовой долей I %.
Образец стандартный стеклянный для определения мутности бактериальных взвесей, мутность которого
эквивалентна 10 международным единицам мутности.
Агар микробиологический по ГОСТ 17206.
Агар мясо-псптонный с массовой долей глюкозы 0,2 %.
Тест-культура С. Diphthcroidcs N 194.
Тест-культура Strept. hacmolyticus Dick !.
1.2. П о д г о т о в к а к и с п ы т а н и ю
1.2.1. Подготовку лабораторной посуды и бокса проводят по пп. 4.1 и 4.2 настоящего стандарта.
1.3. П р о в е д е н и е и с п ы т а н и я
Качество питательных сред проверяют путем высева на них специально подобранных тест-микробов:
С. Diphthcroidcs. Strept. hacmolyticus Dick I.
Культуры лифтсроида или стрептококка, выращенные в течение 18 ч на скошенном мясо-лсптонном ага
ре с массовой долей глюкозы 0.2 %. смывают изотоническим раствором хлористого натрия и тем же раствором
доводят мутность по стандартному образцу до 10 единиц.
Из полученной суспензии переносят I см3в пробирку, содержащую 9 ем’ стерильного нейтрального изо
тонического раствора хлористого натрия —первое десятикратное разведение. 10“’. Затем делают последова
тельные десятикратные разведения, перенося по I ем3 взвеси в 9 см5 изотонического раствора. При каждом
новом разведении взвесь тщательно перемешивают, пользуясь отдельной стерильной пипеткой вместимостью I
см3. Суспензию микробов разводят таким образом до восьмой пробирки (КГ*).
Для биологической оценки испытуемой мясо-псптонной питательной среды применяют четыре последо
вательных разведения 10_3. 10"ь. 10"7, 10"я. что соответствует, примерно. 10000. 1000, 100 и 10 микробным
клеткам в I см3 взвеси. Из каждого указанного разведения, начиная с последнего, вносят по 0.5 см3взвеси в три
пробирки с испытуемой средой.
После инкубации при (37 г 0.5) ‘С в течение 24 ч посевы в пробирках со скошенным агаром увлажняют
(при отсутствии роста) конденсационной жидкостью путем обкатывания пробирок и оставляют в термостате
сшс на 24 ч при той же температуре.
1.4. О ц е н к а р е з у л ь т а т о в
Испытуемые среды признают годными, если тест-культура стрептококка или дифтсроида даст рост через
48 ч нс ниже чем в разведении IQ"7 во всех трех засеянных пробирках.
Допускается отсутствие роста в одной из пробирок, засеянной из разведения КГ7, если отмечается рост
тест-культуры в пробирках из разведении КГ*. При отсутствии роста тест-микроба в одной из пробирок, засе
янных из разведения ИГ7, а также во всех пробирках из разведения 10"*. испытание среды повторяю! на
удво енном количестве пробирок из указанных разведений.
Испытуемая среда годна для применения, если при повторном посеве тест-культуры отмечается рост из
разведения I0"7 нс менее чем в пяти пробирках из шести засеянных.
2. Метод контроля ростовых свойств сред для выращивания анаэробов
2.1. Аппаратура, материалы и питательные среды —по п. 1.1 приложения и указанные ниже:
Тест-культура Cl. Oedematiens 198.
Раствор для разведения культуры: готовят следующим образом: в 1000 см3дистиллированной воды рас
творяют 8.5 г хлорида натрия, добавляют 0.3 см3 тиогликолевой кислоты, устанавливают pH 7,2 ± 0,2 раствором
гндроортофосфата натрия с массовой долей I %, разливаю! во флаконы, автоклавируют при 120 ’С в течение
20мин. Раствор используют в течение 7 суг со дня приготовления. Если срок его хранения более 24 ч. регенери руют
перед посевом путем выдерживания флаконов в кипящей водяной бане в течение 10—15 мин с последую щим
охлаждением до 40 *С.
Среда для получения споровой культуры. Готовят следующим образом: в 1000 см3 воды растворяют 15 г
панкреатического гидролизата казеина: 2 г глюкозы: 5,0 г хлорида натрия: I г агара; 0.3—0.5 г казеина хлор-
кальиисвого и автоклавируют при 120’С в течение 20 мин. После автоклавирования pH среды должен состав лять
7.8 ±0.1. Перед применением среду регенерируют путем выдерживания флаконов в кипящей водяной бане
в течение 10—15 мин с последующим охлаждением до 40 ’С.
Среда Таропии.
2.2. П о д г о т о в к а к и с п ы т а н и ю
2.2.1. Подготовку лабораторной посуды и бокса проводят по пп. 3.1 и 3.2 настоящего стандарта.
2.2.2. Получение споровой культуры
Для биологического испытания тиогликолевой среды и среды Таронци. предназначенных для высева
анаэробов, применяют тест-культуру Cl. Oedematiens 198 (клостридиум).
Вскрывают ампулу с сухой культурой, добавляют 1см3 мясо-псптонного бульона, перемешивают и полу
ченную суспензию переносят в две пробирки с предварительно регенерированной средой Тароипи.
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652—2000.