ГОСТ 25582—83 Стр. 5
2.3.2. Подготовка к исследованию
2.3.2.1. Антиген для проведения реакции нейтрализации гото вят
из хорноаллантоисной оболочки куриных эмбрионов с харак
тернымидля данного вируса изменениями.Хориоаллантоисную
оболочку гомогенизируют с равным количеством буферного изо
тоническогораствора с pH от 7,2 до 7,4, к которому добавлены
антибиотики из расчета по 100 ЕД пенициллина и стрептомицина
на 1см3 раствора.
Суспензию центрифугируют в течение 10 мин с частотой вра
щения 1500—2000 об/мин.
Надосадочную жидкость сливают и используют в качестве ан
тигена, если она содержит вируса не менее 105Е1Д 50/см3.До упот
ребления антиген сохраняют в запаянных ампулах в заморожен
ном состоянии.
2.3.2.2. Сыворотки (больных и переболевших птиц, контроль
ные положительные и отрицательные сыворотки птиц) инактиви
руют в водяной бане при температуре 5б°С в течение 30 мин и до
начала исследования сохраняют такжев замороженном состоя
нии.
2.3.3. Проведение исследования
Реакцию нейтрализации проводят на куриных эмбрионах или
на культурах клеток, используя постоянные количества сыворот
ки и прогрессивнонарастающие 10-кратныеразведения вируса-
антигена.
Реакция нейтрализации проводится в соответствии с таблицей.
Номер
р ял а
Н о м ер
пробирки
Н о р м а л ь н а я
с ы в о р о т к а ,
см 3
Иммунная
сыворотка,
см 31:5
Развеаеинс вируса
1:501:5001:50001:50000
1
1
2
3
4
5
0,5
0,5
0,5
M
i
l
l
0,50,5
0,50,5
0,5
0,5
0,5
1
_
—
—
Z
о
2
3
0.5
0,5
0,5
0,5
—
—
0,5
—
0,5
—
0.5
4
5
—
—
—
—
0,5
—
—
—
—
—
—
0,5
—
—
0,5
В штатив ставят несколько рядов стерильных пробирок. Число
рядов соответствует числу испытуемых сывороток, а число проби
рок в ряду — числу разведений вирусного антигена. Во все про
бирки из ряда вносят по 0,5 см3 соответствующей сыворотки. Па
раллельно с этим ставят контрольный опыт с нормальной (извест
ной отрицательной) и иммунной (известной положительной) сы-
3-96•13