С. 4 ГОСТ 10444.9-88
4.1.3. Посевы на чашках Петри термостатнруют при температуре (37±1) *С в течение 18-24 ч в
анаэростатах с разряжением 0.6-0,8 атм ((0,4-0,6) • 10’ Г1а| или в анаэробных условиях, указанных в
ГОСТ 30425.
4.1.4. После окончания термостатировання отбирают те чашки, на которых выросло от 15до 150
характерных колоний. Подсчитывают количество выросших характерных колоний. Характеристика ко
лоний С. perfringens на селективных питательных средах приведена в приложении.
Корректировку подсчета количества С. perfringens проводят после изучения морфологических и
биохимических особенностей микроорганизмов из колоний, характерных для С. perfringens.
4.2. Подтверждение принадлежности характерных колоний к С. perfringens.
4.2.1. Для подтверждения принадлежности обнаруженных колоний к С. perfringens отбирают про
извольно не менее пяти, характерных для С. perfringens. колоний и пересевают их в жидкую (вязкую)
среду .для мезофнльиых анаэробных микроорганизмов (см. п. 3.2.4).
Жидкие (вязкие) среды подготавливают к анализу по ГОСТ 30425.
Посевы термостатнруют при температуре (37±1) “С втечение 18—24 ч. Культуратьную жидкость
используют для изучения морфологических и биохимических свойств микроорганизмов.
4.2.2. Если колонии в посевах на чашках Петри растут в Blue ковра или среди обнаруженных
колоний много нетипичныхдля С. perfringens, то мазок из ковра или кажущиеся характерные колонии
пересевают, как указано в п. 4.2.1. в питательные жидкие (вязкие) среды для мезофнльиых анаэробов и
термостатнруют при температуре (37±1) ’С в течение 18-24 ч, полученную культуральную жидкость
вновь высевают на чашки Петри (см. 4.1.2) так. чтобы получить раздельные колонии, предназначен
ные для определения культуральных, морфологических и биохимических свойств микроорганизмов,
предположительно относящихся к С. perfringens. Питательные среды, используемые для вторичного
посева на чашки Петри, не должны содержать инклосерина. Вторичные посевы термостатнруют. как
указано в п. 4.1.3.
4.2.3. Из посевов (см. пп. 4.2.1. 4.2.2) готовят препараты, окрашивают их по Граму по
ГОСТ 30425 и микроскопируют. С. perfringens представляет собой неположительные палочки разме
ром 0.9- 1,ЗхЗ,0-9.0 мкм, плохо или необразуюшне в посевах споры. Палочки с закругленными
концами располагаются в одиночку, попарно, в виде цепочек штакетообразных скоплений.
Вспороносных наточках спора расположена субтерминатьно. В посевах устанавливают отсутствие
кататазы по ГОСТ 30425.
4.2.4. Культуры, указанные в пп. 4.2.1. 4.2.2, высевают в пробирки с лакмусовым молоком.
Посевы инкубируют при температуре (37±I) ‘С в течение 8—12 ч.
С. perfringens вызывает бурную ферментацию лактозы с образованием газа, редукцию лакмуса,
коагуляцию молока с последующим его свертыванием и образованием губчатого сгустка красновато-
сиреневого цвета в верхней части пробирки и просветлением сыворотки.
При инкубации посевов при температуре (45±1) ’С характерную реакцию ферментации молока С.
perfringens вызывают уже через 3 -5 ч.
4.2.5. Исследуемую культуру высевают бактериологической петлей уколом в полужидкую пита
тельную средудля изучения подвижности и редукции нитратов. Посев термостатнруют при температу ре
(37±1) ’С в течение 24 ч. С. perfringens неподвижен, он растет по ходу линии посева, не вызывая
помутнения всей среды. После учета подвижности в эту же пробирку вносят реактив на нитриты.
Редукцию нитратов оценивают по ГОСТ 10444.8. Культуры, которые показывают слабую реакцию на
нитриты (т. е. розовый цвет), не учитывают, так как С. perfringens стойко дает сильную и немедленную
реакцию (красный цвет).
4.2.6. Исследуемую культуру высевают бактериологической петлей уколом в питательную
среду (см. п. 3.2.5) дзя определения способности к ферментации лактозы и разжижению желатина.
Посев термостатнруют при температуре (37±1) ’С в течение 18—24 ч. О ферментации лактозы свиде
тельствует желтое окрашивание среды и выделение пузырьков газа в толще среды. После учета фермен
тации лактозы пробирки с посевом выдерживают при температуре (4±2) "С в течение I ч. Если среда
вновь не застыла, то это свидетельствует о гидролизе желатина. При сохранении вязкости среды
пробирку со средой вновь помещают в термостат с температурой (37±1) ’С на 24 ч, охлаждают при
температуре (4±2) ’С и дают окончательную оценку способности выделенной культуры к гидролизу
желатина.
С. perfringens ферментирует лактозу и, как правило, разжижает желатин.
278