ГОСТ 25179-90 С. 2
Бутыль темного стекла вместимостью 2000см’по нормативно-техническойдокументации.
Краситель «Амидо черный 10 Б» (1-амино-2,7-бис (л-нитрофенилазо)-8-оксинафтални-3,6-ди-
сульфокислотыдинатриевая соль) по ТУ 6-09—05—557. ч. д. а.
Кислоталимонная по ГОСТ 3652, х. ч. или ч.д. а.
Натрий ортофосфат двузамещенный, 12-водный по ГОСТ 4172, х. ч. или ч. д. а. или натрий
отофосфатдвухзамещенный, х. ч. или ч.д. а.
Кислота серная по ГОСГ4204. х. ч. или ч.д. а.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч. или ч. д. а.
Водадистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и
оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже
вышеуказанных.
2.2. П о д г о т о в к ак и з м е р е н и я м
2.2.1. Приготовлениебуферногораствора
Взвешивают 31.70 г лимонной кислоты и 8,40 г ортофосфата натрия. Результат взвешивания
записывают с округлением до 2-го десятичного знака. Реактивы помешают и колбу вместимостью
500см* идобаатяют внее400 см’ воды. Колбу нагревают до температуры выше 70"С. Затем содержимое
колбы перемешивают до полного растворения веществ и охлаждают до температуры (20+2) *С.
2.2.2. Приготовлениерастворакрасителя
Навеску 4.60 г красителя, взвешенного с отсчетом до 0.01 г, помешают в колбу вместимостью
500 см1и добавляют в нее 200 см* воды. Колбу нагревают до температуры не выше 70 *С и затем
перемешивают содержимое еедо растворения красителя.
Раствор отфильтровывают черезбумажный фильтр в мерную колбувместимостью 2000см’. Фильтр
промывают водой до удаления следов красителя.
Вэту же колбу переносятбуферный раствор, приготовленный по п. 2.2.1.
Содержимое колбы охлаждают до температуры (20±2) “С. Колбу доливают водой до метки,
закрывают резиновой пробкой и перемешивают ее содержимое путем переворачивания колбы не менее
шести раз.
Раствор должен иметь (2,3±0,1) ед. pH. Если pH раствора не соответствует данному значению,
исправляют его добавлением концентрированной серной кислоты или гидроокиси натрия. Раствор,
разбавленный в 50 раз, должен иметь оптическую плотность (0,82±0,02) на длине волны 590 нм в
кювете с рабочей длиной 10 мм. Если оптическая плотность раствора не соответствует данному значе
нию, то исправляют еедобавившем буферного раствора или раствора красителя.
Раствор следует использоватьтолько после 12 ч выдержки.
Раствор должны хранить в холодильнике вбутыли из темногостекла не более 4 мес, еженедельно
проверяя и исправляя значения pH и оптической гикниости.
2.3. П р о в е д е н и еи з м е р е н и й
2.3.1. В стеклянную пробирку помешают пипеткой 1см’ молока, приливают 20 см’ раствора
красителя и, закрыв пробирку резиновой пробкой, перемешивают ее содержимое, переворачивая
пробирку от 2 до К) раз.
Следует избегать встряхивания, так как при этом образуется трудноразрушимая пена.
2.3.2. Помещают пробирку в центрифугу и центрифугируют при частоте вращения 25 с-1
(1500 об/мин) в течение 10 мин или при частоте вращения 16 с-1(1000 об/мин) —втечение 20 мин.
2.3.3. Отбирают пипеткой 1см’ надосадочнон жидкости, помещают в мерную колбу вместимо
стью 50 см’, доливают колбу до метки водой и содержимое перемешивают. Аналогичным способом
разбавляют рабочий раствор красителя в 50 раз.
2.3.4. Измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре оптическую плотность раз
бавленного раствора красителя по отношению к разбавленному содержимому мерной колбы.
2.3.5. После каждых 24 наблюдений кювету промывают буферным раствором, приготовленным
по п. 2.2.1.
2.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в
2.4.1. Массовую долю белка X, %, вычисляют по формуле
X —7,78 I) - 1.34,
где D— измеренная оптическая плотность, ед. оптнч. плотности;
7,78 —эмпирический коэффициент, %/ел. оптич. шкпиости:
1,34 —эмпирический коэффициент, %.