9
проточной воды в течение не менее 10 мин, при этом температуру раствора устанавливают (20 + 1) °С. Полученный раствор контрольного образца сычужного фермента доводят до метки дистиллированной водой, затем переливают в коническую колбу вместимостью 250 см3 и тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора в холодильнике — 3 сут.
- Приготовление раствора поваренной соли массовой концентрацией 100 г/дм3
100 г поваренной пищевой соли помещают в мерную колбу вместимостью 1 дм3, добавляют дистиллированную воду и перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — 5 сут.
- Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрацией 1 моль/дм3
Раствор готовят по ГОСТ 25794.1 (подпункт 2.1.2) разбавлением концентрированной соляной кислоты.
Коэффициент поправки и точную молярную концентрацию определяют по ГОСТ 25794.1 (подпункт 2.1.3, пункт 1.7).
Срок хранения раствора в емкости с притертой пробкой при комнатной температуре — 3 мес.
- Приготовление солевого экстракта анализируемой пробы сычуга
30 г анализируемой пробы сычугов помещают в лабораторный стакан, приливают раствор поваренной соли массовой концентрацией 100 г/дм3 в соотношении 1:30 и оставляют при температуре (19,0 + 1,0) °С не менее чем на 5 ч, периодически перемешивая, или на ночь.
По окончании экстрагирования экстракт отфильтровывают через плотную ткань (лавсан и др.). Для перевода неактивного предшественника химозина — прохимозина в активную форму осуществляют активацию экстракта. Активную кислотность отфильтрованного экстракта доводят раствором соляной кислоты молярной концентрации 1 моль/дм3 до значения 4,6—4,7 ед. рН и выдерживают 12—16 ч при комнатной температуре. Замеряют объем экстракта.
- Приготовление кислотного экстракта анализируемой пробы сычугов
30 г анализируемой пробы сычугов помещают в лабораторный стакан, приливают дистиллированную воду в соотношении 1:30 и оставляют при температуре (19,0 + 1,0) °С на 2 ч, периодически перемешивая и поддерживая активную кислотность смеси науровне 1,5—2,0 ед. рН раствором соляной кислоты молярной концентрацией 1 моль/дм3. По окончании экстрагирования экстракт отфильтровывают через плотную ткань (лавсан) и замеряют объем фильтрата.
6.3.5 Проведение определений
- Измерение продолжительности свертывания раствора молочного субстрата раствором контрольного образца сычужного фермента и отфильтрованным экстрактом анализируемой пробы сычугов проводят в двух параллельных определениях.
- В два стакана вместимостью по 100 см3 с помещенными в них стеклянными палочками вносят по 50 см3 раствора молочного субстрата. Стаканы устанавливают в ультратермостат температурой (35,0 + 0,5) °С и оставляют на 10—15 мин. При этом уровень воды в бане термостата не должен быть ниже уровня молочного субстрата в стаканах. Затем в каждый стакан вносят по 0,5 см3 раствора контрольного образца сычужного фермента и в начале внесения включают секундомер. Содержимое стаканов тщательно перемешивают стеклянными палочками в течение 3—5 с и оставляют в покое на 1 мин. После чего периодически с интервалом в 1—2 с стеклянной палочкой осторожно на стенки стакана наносят раствор молочного субстрата. В свете настольной лампы наблюдают за появлением хлопьев в стекающем слое раствора молочного субстрата и фиксируют время их образования.
Продолжительность свертывания молочного субстрата отсчитывают с момента внесения раствора контрольного образца сычужного фермента до момента появления хлопьев.
За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не превышает 6 с. В противном случае анализ повторяют.
- Измерение продолжительности свертывания раствора молочного субстрата отфильтрованным экстрактом проводят по6.3.5.2. Предварительно готовятдесятикратное разведение отфильтрованного экстракта анализируемых сычугов дистиллированной водой.
Допускаемое расхождение между параллельными измерениями продолжительности свертывания молочного субстрата — 10 с.
- Обработка результатов
Молокосвертывающую активность сычугов А, усл. ед./г, рассчитывают по формуле
А = U • A •10-у , (1)
?2 • m
где ti — продолжительность свертывания молочного субстрата раствором контрольного образца сычужного фермента, с;