С. 5 ГОСТ 28396-89
При отрицательном результате процесс разделения элюирования повторяют, используя рас
творители IV (Rf патулина 0,!) и V (/^патулина 0.65). Детекцию проводят по п. 4.3.2. При этом
пластинки, проявленные с помощью растворителей II, III, IV и V, перед помещением в камерудля
хлорирования обрабатывают из пульверизатора муравьиной кислотой.
При наличии патулина его находят в точке пересечения условных линий, идущих параллельно
к данному фронту растворителя через пятна стандарта первого и второго направлений движения
растворителей.
4.4.2. Подтверждение путем образования производных
Востродонную колбу вместимостью 25 см3переносят 0.2 см5 раствора экстракта в хлороформе,
полученного по п. 4.3.1, добавляют 0.05 см’ смеси ангидрида уксусной кислоты и пиридина в
объемном соотношении 9:1и выдерживают в водяной бане в течение 10мин при температуре 50 “С.
Затем ацетилируют смесь, выпаривают в вакуумном испарителе при 40 *С, к экстракту добавляют
0,2 см3хлороформа. Такую же процедуру повторяют с 0,2 см3стандартного раствора патулина.
Проводят одномерное хроматографическое разделение дернватизированного экстракта, при
помощи растворителя I или двумерное —при помощи растворителей I и III или IV и V.
Для сравнения пятен используютдеривагизированный стандарт патулина. Детекцию проводят
по п. 4.3.2. Для этого перед помещением в камеру для хлорирования пластинку опрыскивают из
пульверизатора муравьиной кислотой.
При наличии патулина в экстракте после ацетилирования пятно патулина на хроматограмме
должно исчезать и появиться новое пятно с желтой флюоресценцией, имеющее для систем
растворителей 1. 111. IV, V следующие значения Rf: 0.70; 0.65; 0,50 и 0,90 соответственно.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. При обнаружении патулина в экстракте его количество в исследуемом образце определяют
путем сравнения пятна в образце с пятном патулина стандарта.
Содержание патулина (Л), мкгкг-*, вычисляют по формуле
X =
К-с-К
Г m ’
где Vw— объем стандартного раствора патулина. имеющего при визуальной оценке пятен ту же
самую флюоресценцию, что и проба, см3;
с — концентрация патулина в стандартном растворе, мкг/см3;
VK—окончательный объем раствора, используемый для испытания экстракта, см3;
Vt —объем нанесенного на пластинку испытуемого раствора, соответствующего при визуаль
ной оценке пятен стандартному раствору, см3;
т — масса пробы, соответствующая объему очищенного экстракта, г.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение резуль
татов двух параллельных определений, допустимые расхождения отклонения между которыми не
должны превышать 15 % их среднего арифметического значения.