ГОСТ 28396-89 С. 4
Если в экстракте содержатся незначительные количества примесей, то остаток растворяют в
1см3 хлороформа и непосредственно проводят тонкослойно-хроматографические определения.
При наличии больших количеств примесей проводят очистку экстракта колоночной хроматогра
фией.
4.2. Очистка экстракта
Концентрированный экстракт сразу же растворяют в 10см3 смеси бензола и уксусноэтилового
эфира в объемном соотношении 3:1. Полученный раствор вносят в хроматографическую колонку с
силикагелем. Необходимая скорость прохождения экстракта по колонке обеспечивается при
скорости отекания, равной четырем каплям в секунду. Затем через слой силикагеля, едва покрытый
жидкостью, с такой же скоростью пропускают последовательно порциями 300 см3смеси бензола с
уксусноэтиловым эфиром в соотношении 3:1. Первые 50 см3 смеси после выхода из колонки
отбрасывают. Последующие 250 см3смеси, содержащей патулин, собирают и выпаривают в остро
донной колбе при 40 *С в вакуумном испарителе.
4.3. О б н а р у ж е н и е па т у л и н а с п о м о щ ь ю т о н к о с л о й н о й х р о м а т о г р а -
ф и и
4.3.1. К выпаренному досуха экстракту добавляют сразу 1см3хлороформа.
На пластинку для ТСХ наносят на расстоянии 1,5 см от нижнего края и 1,5 см от бокового
края один раз 5 мм3 и дважды по 10 мм3 экстракта и по 5, 10. 30 и 50 мм3стандартного раствора
патулина, что соответствует 10, 20, 40. 60 и 100 нг патулнна. На одно пятно, содержащее 10 мм’
экстракта, дополнительно наносят 20 мм3стандартного раствора (внутренний стандарт).
Пластинку помешают в хроматографическую камеру с системой I и проявляют до подъема
системы на 10 см от линии старта. Затем пластинку извлекают из камеры и сушат при комнатной
температуре.
4.3.2. Высушенную пластинку помешают на 5 мин в камеру для хлорирования, затем на 5 мин
в вытяжной шкаф для того, чтобы испарился хлор, и опрыскивают из пульверизатора раствором
о-дианизидина. Через 15 мин проводят детекцию в Уф-свете под фильтром. Патулин выявляется
на хроматограмме в виде желто-зеленого флюоресцирующего пятна, при этом значение фактора
удержания равно 0.5 при использовании растворителя I.
Если в области Rf патулина появляются нежелательные пятна, покрывающие патулин. то их
отделяют, используя систему растворителя II или проводя двухмерную хроматографию по п. 4.4.1.
4.4. П о д т в е р ж д е н и е н а л и ч и я па т улина
Вслучае обнаружения на хроматограмме желто-зеленых флюоресцирующих пятен, имеющих
то же значение Rf. что и стандартный раствор, а следовательно, свидетельствующих о наличии
патулина, полученный результат подтверждают проведением двумерной хроматографии и (или)
образованием производных. Такое подтверждение необходимо в связи с тем. что различные
содержащиеся в растениях соединения, например гидрометилфурфурол, ведут себя подобно пату-
лину. Если желто-зеленые пятна на хроматограмме исчезают быстрее, чем стандартный раствор,
то это указывает на вероятность отсутствия в исследуемом материале патулина.
4.4.1. Подтверждение наличия патулина с помощью двухмерной тонкослойной хроматогра(1>ии
На точку А (см. чертеж) обеих пластинок помешают от 5 до 10 мм3 исследуемого экстракта.
Объем зависит от концентрации патулина. а также от
содержания нежелательных примесей в экстракте.
Кроме того, на точку С пластинки наносят 10 мм3,
на точки Du В — 20 мм3, на точку Е —30 мм3и на точку
Л —50 мм3 стандартного раствора.
На вторую пластинку наносят одинаковые объе
мы экстракта и стандартного раствора, как описано
для первой пластинки. В отличие от первой
пластин ки на точку Л второй пластинки
дополнительно на носят 20 мм3 стандартного
раствора (внутренний стандарт).
Точка Л —стартовая точка экстракта; точки В —F
—стартовые точки стандартного раствора патулина.
Пластинки проявляют в первом направлении дви жения
с помощью растворителя I (Rf патулина 0,5). а
после высушивания во втором направлении с помощью Направление дбижения
растворителя III (R/ патулина 0,2). второгорастворителя
• А